ELISA试剂盒免疫酶技术是什么?

　　免疫酶技术就是用酶(如辣▲根过氧化物酶)标记已知抗体(或抗原)，然后与组织标本在一定条件下反应，如果组织中含有相应抗原(或抗体)，抗原抗体相互结合形成的复合物中所带酶分子遇到底物时，能催化底物水』解、氧化或还原，产生显色反应，这样就可以〓识别出标本抗原(抗体)分布的位置和性质，通过图像分析并可达到定量的目的。

　　ELISA试剂盒免疫酶技术与免疫荧光技术

　　免疫荧光技术虽已广泛应用于免疫学的研究与诊断，但◥是荧光抗体染色标本不能长期保存，对☉组织细胞的细微结构分辨不清，免疫酶技术则能克服上述不足，标记免疫酶技术的敏感性更优于免疫荧光法，对石蜡切片标本尤为适用，为免疫病理研究开辟了一条新途径，酶显色产物具有较高的▂电子密度，经过适当处理还可以进行免疫电镜观察，免疫酶组化技术分为酶标记法与非标□记抗体技术，前者是将酶通过交联剂结※合在抗体分子上，形成酶标记抗体。后者是将酶作为抗原与相应的特异性抗体连接进行的免疫反应，称为非标记抗体酶技术。

　　免疫酶技术利用酶催化∩底物反应的生物放大作用，提高特异性抗原-抗体免疫学反应检测敏感性的一种标记免疫技术。该技术所用的酶要求纯度高、催化反＠ 应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶》标抗体或抗原性质稳定，继续保留着它的活性部分和催化能力。最好在受检标本中不存☆在与标记酶相同的酶。另外它的相应底物应易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定，光吸收高。

　　ELISA试剂盒固相载体采用免疫酶技术

　　免疫酶技术的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联↓的酶反应底物。可作固相载体的物质很多▅，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。聚苯乙烯为塑︻料，可制成各种形式，在测定过程中，它作为『载体和容器，不参与化学反应，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。

　　聚苯乙烯载体的形状主要有三种：小试管、小珠和微量反应板。小试管的特点是还能兼作反应√的容器，最后放入分光光度计中比色。小珠一般为直径0.6cm的圆球，表面经磨砂处理后吸附面积大增加。如用特殊的洗涤器，在洗涤过程中使圆珠滚动淋洗，效果更好。最常用的载体为●微量反应板，专用于ELISA测定的产品也称为ELISA板，国际通用的标准板形是8×12的96孔式。为便于作少量标●本的检测，有制成8联或l2联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特定的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量反应板ㄨ型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。

　　良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间和同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大。因此每一批号的聚◥苯乙烯制品在使用前☉须检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔后，每孔内加入适当稀释的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底ぷ物显色，终止酶反应后分别测每孔溶液◥的吸光度。控制反应条件，使各读数在0.8左右。计算所有读数的平均值。所有单个读数与平均读数之差应小于10%.与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯板的特点为质↘软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙∩烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略▓高。

　　为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可用以下方法加以检验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和一个典型＠ 的阴性标本。将它们分别进》行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定，然后比较测定结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果判别最大，这种载体◢就是这一ELISA测定的最合适的固相载体。

　　除塑料◆制品外，固相酶免疫测定★的载体还有两种材料：一是微孔滤膜，如**纤维素膜、尼龙膜等，这类测定形式将在本章“膜载体的酶免疫测定”中介绍。另一种载体是以含铁的磁性微粒制作的，反应时固相微粒悬浮在溶液中，具有ζ液相反应的速率，反应结束后用磁铁吸引作为分离的手段，洗涤也十分方便，但需配备特殊的仪器。