仪器与用》具
1、仪器:各类天平、磁力搅拌器、冰箱;
2、用具:烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签;
3、试剂:95%酒精,0.1-1NNaOH,0.1-1NHCl,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水。
方法步骤
(一)母液的配制
母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点:(1)保证各物质成分的准确性。
(2)便于配置时快速←移取。
(3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(10X)
称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养●基取母液100ml。
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化学药品 |
1升量 |
10升量 |
① |
NH4NO3 |
1650 mg/L |
16.5g |
② |
KNO3 |
1900 mg/L |
19.0g |
③ |
CaCl2·2H2O |
440 mg/L |
4.4g |
④ |
MgSO4·7H2O |
370 mg/L |
3.7g |
⑤ |
KH2PO4 |
170 mg/L |
1.7g |
2、MS微量元素母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升↘培养基取母液10ml。
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化学药品 |
1升量 |
10升量 |
① |
MnSO4·4H2O ( MnSO4·H2O) |
22.3 mg/L (21.4 mg/L) |
223mg |
② |
ZnSO4·7H2O |
8.6 mg/L |
86mg |
③ |
CoCl2·6H2O |
0.025mg/L |
0.25mg |
④ |
CuSO4·5H2O |
0.025 mg/L |
0.25mg |
⑤ |
Na2MoO4·2H2O |
0.25 mg/L |
2.5mg |
⑥ |
KI |
0.83 mg/L |
8.3 mg |
⑦ |
H3BO3 |
6.2 mg/L |
62 mg |
注意:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5mg)或100倍量(25mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml(即含0.25mg的量)加入到母液中。
3、MS铁盐母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养∏基取母液10ml。
化学药品 |
1升量 |
10升量 |
Na2·EDTA |
37.3 mg/L |
373 mg |
FeSO4·7H2O |
27.8 mg/L |
278 mg |
注意配制〓时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐ξ较难完全溶解,可适当加热。混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然▲后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保∩存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母∏液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
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化学药品 |
1升量 |
10升量 |
① |
烟酸 |
0.5 mg/L |
5mg |
② |
盐酸吡哆素(VB6) |
0.5 mg/L |
5mg |
③ |
盐酸》硫胺素(VB1) |
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④ |
肌醇 |
100 mg/L |
1 g |
⑤ |
甘氨酸 |
2 mg/L |
20mg |
5、生长调节剂
单独配制,浓度为1-5 mg/ml(书中为0.5-1mg/ml),一般配成4 mg/ml 。
配制培养㊣ 基母液时注意事项:
①一些离子易发生沉淀,可先用少量蒸馏◥水溶解,在按配方顺序依次混合;
②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水;
③药品应用化学纯々或分析纯;
④溶解生长素时,可用少量0.5 –1N的NaOH 或95%酒精溶解,溶解分裂素类用0.5–1N的HCl加热溶解。
(二)母液↘的保存
1、装瓶:将配制好的△母液分别装入试剂瓶中,贴好标签,注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。注意将易分解、氧化的溶液,放入棕色瓶中保存。
2、贮藏:4℃冰箱。
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