一、材料

 幼嫩叶子。

二、设备

移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管，弯成○钩状的小玻棒。

 三、试剂

1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/LTris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。

2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。

3、80：4：16/氯仿：戊醇：乙醇

4、 RnaseA母液

5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/LNaAc。

四、操作步骤：

1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。

2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研〗钵中加液氮磨成粉状后立即倒入【预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。

3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相¤分层(必要时可重新混匀)。

4. 室温下5000rpm离心5分钟。

5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即▆出现絮状DNA沉淀。

6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸■上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。

7. 如DNA不形成絮♂状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收ㄨ集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。

8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。

9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤№)。

10. 加入1/10体积的3mol/LNaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮▲状沉淀。

11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。

12. 将DNA重溶解于1ml TE,-20贮存。

13. 取2μl DNA样品在0.7%Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。

[注意] 5g样品可保证获得→500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。