免疫组化实验所需试剂
1)3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml)：柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g.
3)PBS缓冲液(pH7.2~7.4)：NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L.
4)1mol/L的TBS缓冲液(pH8.0)：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml.
5)酶消化液： a、0.1%胰蛋白╱酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
6)0.5mol/L EDTA缓冲液(pH8.0)：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml.
7)封裱剂：
a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液(pH9.0~9.5)等量混合;
b、油和TBS(或PBS)配制。
8)TBS/PBS pH9.0~9.5,适用于荧光显微镜标本;pH7.0~7.4适合于光学显微镜标本。
免疫组化实验操作流程：
1、脱蜡和水化
脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
1)组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟;
2)无水乙醇中浸泡5分钟;
3)95%乙醇中浸泡5分钟;
4)70%乙醇中浸泡5分钟;
2、抗原修复
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。
1)抗原热修复
(1)煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲〓溶液(pH6.0)至95℃左右，放入组织芯片加热10~15分钟。
(2)高压热修复 在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液(pH6.0)。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
( 3)酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，消化时㊣ 间约为5~30分钟;胃蛋白酶消化37℃时间为30分钟。适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen,Complement,Cytokeratin,C-erB-2,GFAP,LCA,LN等。
(4)微波热修复 在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液(pH6.0)至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。适用的抗原有：AR,Bax,Bcl-2,C-fos,X-jun,C-kit,C-myc,E-cadherin,Chromogranin A,Cyclin,ER,Heat shock protein,HPV,Ki-67,MDMZ,p53,p34,p16,p15,P-glycoprotein,PKC,PR,PCNA,ras,Rb,TopoismeraseⅡ等。
