人血管内皮细胞生长因子165b(VEGF165b)ELISA试剂盒操作步骤需要而未提供的试剂和器材1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱4. 蒸馏水或去离子水备注：经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检╲测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。注意事项1. 严格按照规定◣的时间和温度进行温育▓以保证准确结果。所有试剂都必须☆在使用前达到室温20-25℃。使用后立即卐冷藏保存试剂。2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。3. 消除板底残①留的液体和手指印，否则影响OD值。4. 底Ψ 物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。6. 在储存和温育时避免强光直接照→射。7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。8. 任♀何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体⊙。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。9. 不能使用过期产品。10. 如果可能传播※疾病，所有的样品都应∞管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液↙的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出【所需板条，剩余板条用自封袋♀密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白」孔不加。4. 除空○白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣←根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应◤孔，37℃水浴锅或恒温箱温︽育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍╲干，每孔■加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液〖，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底ω物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止¤液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。实验结果计算以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度①值为纵坐标，在坐标纸上或用相◣关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方□　程，计算出样品☆的浓度。1.