氟苯尼考（FF）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。药品名称：通用名：氟苯尼考（FF）酶联免疫诊断试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞▼及其它相关样本中氟苯尼考（FF）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中氟苯尼考（FF）水平。用纯化的氟苯尼考（FF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次〖加入氟苯尼考（FF）抗原，再与HRP标记的氟苯尼考（FF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的〗催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色¤。颜色的深浅和样品中的♂氟苯尼考（FF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通△过标准曲线计算样品中氟苯尼考（FF）抗原浓度。 试剂盒组成◤ 1 25倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 标准品（36μg/L） 0.5ml×1瓶3 酶标包被板 12孔×4条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释♀液 3ml×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个标本要▂求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进◣行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避】免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根∩过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的ㄨ稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后◥从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三〇孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释█液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七◣、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释→液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都︻为50μl，浓度分别为24μg/L，16μg/L ，8μg/L，4μg/L， 2μg/L）。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试＠剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测∮样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀√释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将25倍浓缩●洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶♀标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔╳先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时∮蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算 以标准物的浓度为横坐♀标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据∮样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓▓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓№度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开↘封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不╱影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经㊣常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐↑使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔的第一孔的OD值），请先←用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算＠ 时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物∏请避光保存。7．试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试卐剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以〓英文说明书为准。检测范围：1μg/L -30μg/L规格：48人份/盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月