实验试剂溶壁酶
甘露醇的PDB肉汤
MYG琼脂培养基
实验设备摇床
培养箱
实验步骤1. 将菌丝体接种到含100 mL的PDB介质的容积250 mL瓶中(200g土豆，20g葡萄糖，1L水)。
2. 恒温28°C避光培养菌丝体，保持培养箱以50转/分的转速持续摇动。
3. 将培养物无菌纱布过滤灭菌。
4. 取大约5g菌丝体放于容积为50 mL 的试管中，试管中含20 mL已过滤◢灭菌的1.5%溶壁酶和0.6 M甘露醇(广东省微生物研究所，中国)。
5. 然后30℃孵育2h，期间不时搅拌。
6. 2 h后取出菌丝片段，放于MYG琼脂ㄨ培养基中(2%麦芽提取物，0.2%酵母提取物，2%葡萄糖，1.5%琼脂)，用于灵芝原生质体再生。
7. 稀释原生质体悬浮至浓度为1×10 4细胞/毫升，取50μL稀释后的原生质体悬浮液接种←于MYG培养基中，25°C，避光培养。
