检测范围： 96T5pg/ml-125pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素4（IL-4）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊白细胞介素4（IL-4）水平。用纯化的绵羊白细胞介素4（IL-4）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素4（IL-4），再与HRP 标记的白细胞介素4（IL-4）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗◆体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素4（IL-4）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中绵羊白细胞介素4（IL-4）浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（240pg/ml） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准⊙品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释〇液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提√取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测卐含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化▃物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品▲稀释液60pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准々品加入150μl 标准品稀释液30pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液15pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液7.5pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释〖液40μl，然后再加待测样▓品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁◥，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封【板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤︼液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空∩调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定︽应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为◢纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘ζ以稀释倍数；或用※标准物的浓度与OD 值计算↑出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶♂析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试①验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做№复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释♂液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘↙以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结※果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液∑和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月