应用效益
■ 各种脂溶性维生素配方的快速分析。
■ Waters® ACQUITY UPC2™系统可成功地分析卐六种不同配方的脂溶性维生素。一种技术能够快速分析这些不同配方。
■ 该系△统通过让实验室在一个系统上，使用一种技术来分析各种FSV配方，从而简化脂溶性维生素分析。
■ 每种脂溶性维生素配方都可以得到快速≡的分析，目标成分可很好地从赋形剂材料中解析出来。
■ 维生素A、E和K1同分异构体被成功地分析、分离。
沃特世解决方案
ACQUITY UPC2系统
ACQUITY UPC2色谱柱工具包
Empower™ 3软件
ACQUITY UPC2 PDA检测器
关键词
UPC2，脂溶性维生素，维生素E，维生素A，维生素D3，维生素K1，维生素K2
简介
脂溶性维生素(FSV)(通常来自充油胶囊、充粉胶囊或压缩片粒)的分析是一项具有挑战性的任务。最常见的情╳况是，这些配方的分析都采用正☆相色谱法，使用传统的正相溶剂(己烷、叔丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等)，采购∏和处理的成本相当高。用于FSV分析的其它分析色谱技术包括反相液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法和比色技术。超高效合相色谱(UPC2™)为脂溶性维生√素分析提供了一种可行的技术，它是一种具备成本效益的、可持续的和绿色环保的替代技术，降低了有机♀溶剂的用量，分析时间〓快，保持了色谱数据的品质。使用
ACQUITY UPC2系统分析了一系列FSV配方。被检验的配方有：维生素A、维生素A+D3、维生素E，维生素D3、维生素K1和维生素K2，如表1所示。这些实验的结果表明，UPC2有可能替代当今正在使用的许多分离方法成为唯一的一种技术。
实验
系统： ACQUITY UPC2包括：二元溶↘剂管理器、样品管理器
合相管理器、色谱柱管理器、PDA检测器
色谱柱： ACQUITY UPC2 BEH，
3.0 x 100mm，1.7μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
3.0x 100mm毫米，1.8μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
2.1 x 150mm，1.8μm
数据系统： Empower 3软件
分离方法： 每种分离方法的∏详细介绍包含在本应用文集的单个结果和讨论部分中。
样本制备
充油胶囊(维生素A、A + D3、D3)——去除四种胶囊的外壳并分别溶解于10毫升的▲异辛烷中，无需进一步前处理。去除单个维生素E胶囊的外壳并溶解于10毫∮升的异辛烷中，无需进一步预处理♀。
用异辛烷对八片碾碎的维生素K1片进行超声处理30分钟。沉淀后，将一小份萃取液通过一个▃1.0μm玻璃纤维过滤器直接过滤到样品瓶中。
去除八粒充粉维生素K2的外壳，并用异辛烷进行超≡声处理30分钟。沉淀后，将一小份萃取液通过一个1.0μm玻璃纤维过滤器直接过滤到样品瓶中。
结果♀与讨论
维生素 A
该维生素A的↓配方为源于鱼肝油，含豆油、明胶、甘油和⊙水等活性成分。如图1所示，维生素A棕榈酸酯的两种主要形式(顺式和反式异构体，分别为1.325分钟和1.394分钟)和赋形剂的小峰得△以完全分离，并标示于图中，洗脱范围为2.0分钟至2.5分钟。该分离采用梯度模式，二氧化碳◆和∩甲醇(含0.2%甲酸)在3min内从97:3变化到90:10，主动背压调节器(ABPR)压力为2176 psi，详细的参数如表2所示。使用该分离方法，维生素A乙酸酯、棕榈酸酯和视黄醇被轻易分离，如图2所示。
维生素A + D3
与前例相似，维生素A+D的配方为：源于鱼肝油，含豆油、明胶、甘油和水等活性成分。同样，两种形式的ξ 维生素A棕榈酸酯(顺式和反式异构体，分别为2.626分钟和2.851分钟)在赋形剂峰之前出峰。为了将维卐生素D3(VD3，6.862分钟)从主要赋形剂和配方中所含的其它化合物中完全分离出来(如图3所示)，需要使用更长的色谱柱来提供足够的分离效率＠，才能完成该目标。系统具有足够¤的灵敏度，可轻松〒地检测到维生素D3的峰，如图3所示。
该分离采◇用二氧化碳和←甲醇〓(含0.2%甲酸)进行梯度洗脱，按99:1到90:10的比例在10分钟内完成，详细信息如ω 表3所示
维生素D3
使用与维生素A+D3相同的分离条件(如表3所示)，维生素D3(胆钙化醇，6.867分钟)被轻松地从胶囊赋形剂材料(标记为︼主要成分为葵花籽油)中分离出来，如图4和表3所示。
维生素 E
针对☆维生素E胶囊开发出一种非常快速的梯度分析法(运行⌒时间约90秒)，可轻松地将4种生育酚异构体(α、β 、γ、δ-VE)基线分离。该分离方法采◣用梯度洗脱，二氧化碳和甲醇按98:2至95:5的比例在1.5分钟完成，详细信息如表4所示。
维生素 K1
采用简单的等度方法，包含99%二氧化碳和1%的甲醇⁄乙腈(1:1)，维生素K1片中的两个峰得到完全的基线分离(Rs > 2.0)，如图6所示。两个峰的紫外光谱(紫外光位于246 nm通道时同时收集)是相似的，如图7所示，表明这两个峰是相关的。尽管没有得到确认(分析的时候没有每种异构体的∞单一标准品)，这两个峰很可能是叶▅绿醌(维生素K1)的立★体异构体，详细信息如表5所示。
维生素 K2
维生素K2由甲基萘醌(menaquinone，MK)组成，形式从MK-3到MK-14。不同形式的维生素K2的侧链长度由可变数量的非饱和异戊二烯单元构成。该片剂〇配方显示了一个主峰和多个较小的峰(如图8所示)，采用95:5二氧化碳:甲醇的等度分离法，被鉴定为MK-7(数据无显示)。这一结果与胶囊标签上的说※明是一致的，即：该配方应该∞主要含有MK-7。详情的分离方法如表6所示。
结论
■ 沃特世的ACQUITY UPC2系统可成功地分析六种不同配方的脂溶性维生素。
■ 每种FSV配方都可以得到快速的分析，目标成分可很好地从赋形剂材料中分离出来。
■ 维生素A、E和K1的同分异构体被成功地彼此分离。
■ 该系统通过让实验室在一个系统上使用一种技术来分析各种FSV配方，从而极大地简化了FSV分析。
