核糖体是细胞内蛋白质合成的场所，也是细胞中含量最多的RNA-蛋白质复合体，在真核生物中数目庞大。核〗糖体除参与蛋白质合成外，还与细胞的生长、分化、细胞寿命、胚胎发育以及癌症的发＠ 生有关，在快速生长的酵母细胞中，细胞花费了大部分的能量用于产生、组装成熟核糖体的相关成分，与核糖体生物发生相关基因的转录占到整个细胞转录体系的60%以上。
除此之外，还可⊙通过对核糖体的研究间接了解到某◣些基因的表达活性或在不同的胁迫条件下，特定基因在细胞内表达量的变化。通过结合于核糖体亚基和多聚核糖体上的RNA，利用qRT-PCR技术，可以直接了解到基因的表达活性。如何实现核糖体的分离，获得相关信息成为了核糖体研究的关键。以下为利用密度梯度方◣法进行核糖体分离的︻相关流程及方法，可供ζ核糖体研究的相关人员参考。
在密度梯度液的制备过程中，由于层铺法产生的是点梯度，分离效果差，故采用Biocomp公司生产的ㄨ全自动密度梯度制备仪进行完全线性密度梯度溶液的制备。在SW41离心管中先加入1/2体积10%蔗糖溶液，再由针头插入底部加入〇1/2体积45%蔗糖≡梯度液(每个梯度液加入量以Biocomp提供的标尺为准)，放置于Biocomp梯度制备仪中，选择相应的内置程序(转子为SW41，梯度介质为蔗糖，梯〇度范围为10-45%)运行，便可直接获得10-45%完全线性蔗糖梯※度溶液。
关于细胞样品的处理，以培养的Hela细胞为例，先用PBS(pH 7.4)洗两次，然后加入细胞裂解缓冲液，缓冲液包含→50mM Tris-HCL，100mM KCL(或NaCl)，5mM MgCl2，1mM DTT，100ug/ml cycloheximide(环己酰亚胺)，40U/ml RNasin，以及1% NP-40和1% sodium deoxycholate(脱氧↙胆酸钠)。
裂解后的细胞，首先对细胞裂解液进行预离心，4℃，10000-13000rpm离心10min，然后取上清液上样于10-45%蔗糖密度梯度溶液中，梯度液包含20mM Tris-HCl(pH 7.5)，5mM MgCl2, 100mM NaCl以及50ug/ml cycloheximide。对于核糖』体的分离多依据各组分的沉降系数的▲不同⌒，因此采用速度区带离心方法。放置离心管于Beckman超速」离心机中，转速36000-40000rpm，4℃离心2-3h，使得核糖体亚基及多聚核糖体在梯度溶液中得到分离。
核糖体分离后的收集及绘图，手动方法收集易产♀生分层的扰动，且无法『绘制吸收峰图。故采用Biocomp全自动密度梯度分离系统进行收㊣ 集，结合紫外检ξ 测器，检测样品在260nm处的吸收，实时绘制吸收峰图。利用馏分收集器进行分管收集样品，通过吸收峰图对应的离心管号，便可以直接获得各核↓糖体亚基或多聚核糖体上的RNA，结合qRT-PCR等技术可进行进一步相关研究。
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