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高效液相色谱仪EX1600
目的应用高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素的含量。方法采用Shim-pack-C18柱(5μm,150mm×4.6mm),甲醇-0.1%磷酸(25.3∶74.7)为流动相,流速0.9mL/min,检测波长为250nm。结果线性范围为0.114~0.570μg,r=0.9996,回收率为98.74%,RDS=0.67%。结论该方法简便、准确、灵敏,可用于该制剂的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法;葛根素;降脂减肥颗粒
降脂减肥颗粒是由何首乌、葛根、三七等10味中药组成,具有滋补肝肾、养益精血、扶正固本、通络定痛、健脾豁痰、明目生津、润肠通便的功效,用于各型高血脂症、心脑血管硬化、单纯性肥胖、习惯性便秘、痔疮出血。方中葛根为主要药物。本实验采用高效液相色谱法对制剂中葛根素进行含量测定,以便更好地控制其产品质量。
1仪器与试药
日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10A紫外检测器,KQ-250型超声波处理器。葛根素对照品购于中国药品生物制品检定所(批号0537-9910,HPLC面积归一化法,测定含量为99.26%);降脂减肥颗粒(6g/袋)由吉林森工健今药业有限公司提供。其它化学试剂均为国产,AR级。
2方法与结果
2.1色谱条件[1]
色谱柱:Diamonsil-C18柱(5μm,4.6mm×150mm);流动相为甲醇-0.1%磷酸(25.3∶74.7);流速:0.9mL/min;紫外检测波长:250nm;理论塔板数按葛根素计算,不低于3000;柱温为室温。
2.2对照品溶液的制备
精密称取葛根素对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.05mg的溶液,摇匀,作为对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
取本品20g,研细,取1g,精密称定,加入30%乙醇30mL,置具塞锥形瓶中,称定重量,超声处理20min,放冷,再称定重量,以30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4阴性对照溶液的制备
按处方量制备不含葛根药材的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,注入液相色谱仪中※,按上述条件测定。结果表明,阴性对照溶液色谱图中与对照品位置处无干扰,此法可行(见图1)。
2.5线性关系考察
精密吸取葛根素对照品溶液4、8、12、16、20μL,分别注入高效液相色谱仪中进行分析。以对照品进样量(μg)为横坐标,以对照品的峰面积为纵坐标作图,得一条通过原点的直线,回归方程为:Y=2490376.534X+19847.951,r=0.9996。结果表明,葛根素在0.114~0.570μg间呈良好的线性关系。
2.6精密度试验
精密吸取供试品溶液连续5次重复进样,测得相对偏差RSD=0.53%。
2.7稳定性试验
精密吸取供试品溶液在0、2、4、8h分别进样,结果葛根素峰面积的RSD=0.24%,表明在8h内供试品溶液的葛根素含量稳定。
2.8重现性试验
精密称取同一批号样品5份,按供试品溶液的制备方法制备,依法进样分析,样品中葛根素含量的RSD=1.05%,表明其重现性良好。
2.9加样回收率试验
精密称取葛根素对照品适量,加入已测葛根素含量的降脂减肥颗粒样品(取约1.0g,精密称定)中,置具塞锥形瓶中,精密加30%乙醇100mL,按供试品溶液的制备方法制备,进样,测定,计算回收率。结果见表1。表1回收率试验测定结果(略)
2.10含量测定
按上述方法制备供试品溶液,测定3批降脂减肥颗粒中葛根素的含量,结果见表2。表2降脂减肥颗粒中葛根素含量测定结果(略)
3讨论
根据葛根素的溶解性,分别以乙醇、30%乙醇为提取溶媒进行试验,结果表明,以30%乙醇提取制备供试品溶液能使葛根素提取完全,以甲醇为溶媒制备的溶液中杂质峰较少,含量偏低,故选择以30%乙醇为溶媒制备供试品溶液。
有关葛根素的高效液相色谱法含量测定方法较多,流动相有采用乙腈、甲醇、水、冰醋酸等系统[2]。我们采用甲醇、水系统,色谱分离效果较为满意,分离度及峰形对称性较好。(谢沂楠/编辑)