规格：100T/500T/1000T/5000T 价格40/220/350/950,产品简介
本CCK-8细胞活力检测试剂盒含有WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，在电子载体存在的情况下WST-8被细胞内脱氢酶氧化还原后▅生成水溶性的橙黄色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞△数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法◥,可替代传统的MTT法。
试剂盒组份
目录号 组 份 规格 储存条件
CCK-8溶液 1mL（100 assays） 4℃避光，一年有效
CCK-8溶液 5mL（500 assays） 4℃避光，一年有效
CCK-8溶液 10mL（1000 assays） 4℃避光，一年有效
CCK-8溶液 30mL（3000 assays） 4℃避光，一年有效
CCK-8溶液 50mL（5000 assays） 4℃避光，一年有效
CCK-8溶液 100mL（10000 assays） 4℃避光，一年有效
试剂盒以外自备仪器和试剂
低速№离心机↘、酶标仪（450nm波长）、平板摇床、微量移液器、96孔培养板、CO2培养箱
操作步骤
1. 通常细胞增殖实验每孔加入100ul （2000个细胞），细胞毒性实验每孔加【入100ul（10000个细胞） (具体每孔所用的细胞的数目→，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。将培养板★在培养箱预培养24小时 (在37℃，5% CO2的条件下)。2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激。3. 将培养板在培养箱继续培养一段适当的时间 (例如: 24小时或48小时)。4. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加◥了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没□有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培Ψ养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 (尽量不要在孔中生成气泡)5. 将培养板在培↘养箱内孵育1-4小时。6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸▓光度。7. 如果暂时不测定OD值，打算以后测定】的话，可以「向每孔中加入10 μl 0.1 M HCl溶液或者1%（W/V）SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。结果判断(1) 细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值（完全培养基加CCK-8，无细胞），各重复孔╲的OD值取均数±SD。 细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。 细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 (2) 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)或T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
保存条件
4℃避光，一年有效
注意事项
1. 接种时注意细』胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可※以每接种数孔即混匀一下。培养板周围一圈孔培养基≡容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基或无菌PBS，而∏不作为指标检测孔。2. CCK- 8的zuijia反应时间以具体显色的juti时间为准。diyi次做实验时，建议先做数孔摸索接种细胞的zuijia数量和加入CCK-8试剂后的zuijia孵育时间。一般情况下，白细胞较难显色，因此需要较长的CCK- 8反应时间或增加细胞数量 (～105个细胞/孔)。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于〓悬浮细胞，在加入CCK- 8孵育1- 4小时后，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定决定CCK- 8zuijia孵育时间。若显色困难，可将培养板放回培养箱，继续培【养数小时后再测定。对于贴壁细胞，CCK- 8的孵育时间一般为1- 4小时，多数细胞在培◇养30分钟左右即︻可肉眼观察到明显的显色反应，培养2-4小时左右检测效果zuijia。3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的〖还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。含有酚红的培养基※不影响本试剂盒做细胞活性的测●定。4. 如何判定待测溶液是否有还原性？不含细胞的待测溶液孔中加入CCK-8溶液10μl，孵育1-4小时，测定在450 nm处的■空白吸光度。如果该吸光度很小，说明待检测体系中存在较少的还原剂，正式检测时即可直接加入CCK-8 ；如果该吸光度相对较大，说明待检测体系中存在较多的还原剂，正式检测时则需要除去→培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基和10 μl CCK-8进行检测。5. 如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议设定600 nm (或600 nm以上) 作为参比波◎长，扣除↘参比波长的O.D值即可。6. 请穿实验服并戴一次性手套操作。
