使用Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类
1.操作步骤
Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存(干燥)并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的特定需求进行修改。
a)在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM,Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。
b)将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储⊙备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选『择的缓冲液(0.04%Pluronic?F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确□切浓度必须根据经验确定。
注意:非离子型洗涤剂Pluronic?F-127有时用于增加Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶ぷ性。 各种Pluronic?F-127可从百萤购买◥。
c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)添加到染料工作溶液中(浓度为0.5-1 mM)
注意:各种ReadiUse 丙磺舒(包括水溶性钠盐和稳定溶液)均可从♀百萤购买。
d)将等体积的√染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。
e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟,然后将板在室温下再孵育15分钟。
f)用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂(如1 mM丙磺舒)的缓冲液替换染料工作溶液,以去除多余的探针。
g)对于Calbryte 520 AM,在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试∴∞,对于Calbryte 590 AM,使用540/590nm进行钙测试,对于Calbryte 630 AM,使用610/640nm进行钙测试。
货号 | 20650 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
规格 | 2x50 ug | 价格 | 1236 |
Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 515 |
分子量 | 1090.90 | 溶剂 | DMSO |