人γ干扰素（IFN-γ）酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清△、血浆、组织匀浆及相关液体样本中γ干扰素（IFN-γ）的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人γ干扰素（IFN-γ）水平。用纯化的人γ干扰素（IFN-γ）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人γ干扰素（IFN-γ），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转【化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的→人γ干扰素（IFN-γ）呈正相关。用酶标ξ 仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人γ干扰素（IFN-γ）含量。
试剂♀盒组成：
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品◇稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×浓缩卐洗涤液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：标准品浓度依次为：800、400、 200、100、50、0pg/mL.
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再★次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗∮凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中↓如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如◢有沉淀形成，应再次离∏心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内♀的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度◣达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入』一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀↙浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备⌒ 用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行「实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复▽冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2. 加样：分别设空白孔（空白ω对照孔不加样品及酶标试剂，其余各♂步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板◥上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽▂量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
4. 温育：用封板膜封板】后置37℃温育60分钟。
5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用∩。
6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显◥色剂B50μl，轻轻⌒震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝」色立转黄色）。
9. 测定：以空♀白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终◣止液后15分钟以内进行∑ 。
注意事项：
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被︻板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析△出，稀释时可在水浴中加温助∮溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器√，并经常校对其〖准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内，如标本数量●多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标╳准品孔第yi孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀ξ释倍数（×n×5）。
5. 封板膜∴只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读【数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与▓英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准Ψ物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准※曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物▆的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品㊣浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒〗性能：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2. 批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。
检测范围：
25 pg/mL – 800 pg/mL
灵敏度：
zui低检测浓←度小于1 pg/mL
保ω 存条件及有效期：
1. 试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期： 6个月
