货号 | 22797 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
规格 | 100 Tests | 价格 | 3840 |
Ex (nm) | 532 | Em (nm) | 619 |
分子量 | 溶剂 |
样本实验方案
简要概述
1.用测试◤化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵︻育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度(截止= 610 nm)
溶液配制
储备溶○液配制
1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液(200X):将65 μL DMSO加到Z-DEVD-ProRed (组分A)的小瓶中,制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液,避光储存。
工作溶液配制
将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储◣备溶液添加到10 mL的测■定缓冲液(组分B)中,并充分混合以制←成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意:分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液(来自步骤2.2)和测定缓冲液(组分B)。 避免重复冻结/解冻循环。
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡↙检测试剂盒 红色荧光
货号 | 22797 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 100 Tests | 价格 | 3840 | |
Ex (nm) | 532 | Em (nm) | 619 | |
分子量 | 溶剂 | |||
产品详细介╳绍 |
简要概述
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞凋亡的¤试剂盒,我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具◤。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在√通过测量Caspase 3的来监测细胞凋亡。由于caspase-3(CPP32 / apopain)的对于细胞凋亡的▆启动很重要,因此caspase 3被公认为是细胞凋亡的可靠指标。半胱天冬酶3具有对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)的↑底物选择性。该试剂盒◣使用Z-DEVD-ProRed 作为caspase-3活性的荧光指示剂。半胱天冬酶3对ProRed DEVD封闭肽残基的切割产生强红色荧光的ProRed ,该荧光在?620 nm处以荧光光谱法进ぷ行监测,激发波长约为◥530 nm。该试剂盒可提供所有必需成分,并具有优ㄨ化的测定方案,该测定适用于高通量测定。该试剂盒以→96孔板每孔使用100 uL试剂,可提供足够的试】剂来执行100次测定。该试剂盒以384孔板每孔使用25 uL试剂,可提供足够的试剂来执行400次测定。Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。
适用仪器
荧光〇酶标仪 | |
激发: | 540nm |
发射: | 620nm |
cutoff: | 610nm |
推荐孔板: | 黑色透明 |
读取模式: | 顶或底读模式 |
产品说明书
样本实验方案
简要概述
1.用测试々化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在○室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度(截止= 610 nm)
溶液配制
储备溶液配制
1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液(200X):将65 μL DMSO加到Z-DEVD-ProRed (组分A)的小瓶中,制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液,避光储存。
工作溶液配制
将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储备溶液添加到10 mL的测定缓︾冲液(组分B)中,并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意:分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液(来自步骤2.2)和测定缓冲液(组分B)。 避免重复冻结/解冻循环。有关细胞样品制备的指南,请点击查看。
操作步骤
1.准备细胞:
1.1 对于贴壁细胞:将细胞在生长培养基中︻以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔,或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔,过夜培养。
1.2 对于非贴壁细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞♀沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中,用于96孔;或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前,将板以800 rpm的速∩度离心2分钟。 注意:应单独评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的
细胞密度。
2.通过向PBS或所需◤的缓冲液中加入10 μL /孔的10X测试化合物(96孔板)或5 μL /孔的5X测试化合物(384孔板)来处理细胞。对于空白孔(不含细胞的♀培养基),添加相同量的化合物缓冲液。
3.将细胞板在37°C,5%CO2的培养箱中孵育(对于用星形孢●菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时)以诱导凋亡。
4.加入Caspase 3/7底物工作溶液(100 μL /孔/ 96孔板或25 μL /孔/ 384孔板。)
5.在避∮光的条件下,在室温下孵育平板至少1小时。注意:如果需要,在室温下①添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟,向选¤定的样品中添加1 μL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂,以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。
6.使用荧光酶标仪(Ex / Em = 540/620 nm(截止= 610 nm))监控荧光强度。注意:有时,底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底☉部读取模式,则以800 rpm的速度离心细胞『板(特别是非粘附细胞)2分钟(制动)。
图示