BioChek猪圆环2型（PCV2）抗体检测试剂盒♂ 产品代码: SK105 猪圆环2型（PCV2）ELISA检测试剂盒，可以从猪的血液样品中检测到圆环2型抗体的量。微量板用灭活的PCV2包被，将稀释的猪血清样品加入到微量孔中，样品中PCV2抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗猪IgG抗体加入孔中，与抗原抗体】复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。pNPP显色剂作为底物被加入，如果PCV2抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的该抗体的量有关。 提供的试剂 1．包被板微量板上包被灭活的PCV2 2．酶标二抗碱性磷酸酶标记的抗猪抗体：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1%重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液 3．底物片PNPP（p-磷酸硝基苯）用底物缓冲液溶解 4．底物缓冲液含有与酶反应的相关物质的二乙醇胺缓冲液 5．终止溶液含有NaOH的二乙醇胺缓冲液 6．阴性对照不含猪圆环2型抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1%重量/体积）及蓝色染料。 7．阳性对照含猪圆环2型特异性抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1%重量/体积）及红色染料。 8．样品稀释液含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1%重量/体积）的磷酸盐缓冲液。 9．洗液含有Tween的磷酸盐缓冲液（粉）。 材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器 含405nm波长的酶标仪 洗板机 注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。 2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。 3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。 4．试剂盒仅供体外使用。 5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。 试剂的准备 1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5ml的底物缓冲溶液，要求混合3分钟直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在+4℃避光下保存1周。 将底物片放入干净的容器中再添加相应体积的底物溶解液。 请勿用手直接触拿底物片。 2．洗液：将一小袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。 3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。 样品的准备 每个样品『按照1:50稀释，即在样品稀释板上用5μl样品加245μl的样品稀释液，并在预稀释板上记录好样品和对照的位置。 1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。 2．每份样品都要换一个未用过的新的吸头。 试剂盒中的阳性和阴性︽对照不要稀释！！ 操作步骤 1．从密封袋中取出用PCV2包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。 2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。 3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。 4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。 5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。 7．重复步骤5。 8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。 9．各孔加100μl终止液，终止反应。 10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。 结果 为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.35，阳性对照的平均值和阴性对照的平均卐值之差应大于0.15。 实验室中的温度的差异会造成OD值的偏高或偏低。实验中测试的样品值要和对照结合起来，这个实验仍然是有效的。 对于猪血清中圆环2型的抗体量的判定，阳性对照是一个重要的对照标准。 结果判定 样品中抗体的相对含量可以参考阳性对照来计算，其关※系可以通过S/P值（样品和阳性对照的比值）来计算。 1．S/P值的计算 待检样品的平均值－阴性对照的平均值 ――――――――――――――――――＝S/P 阳性对照的平均值－阴性对照的平均值 判定S/P值大于等于0.5的样品含有抗PCV2的抗体，认为是阳性。 2．抗体滴度的计算 Log10效价＝1.1×Log10S/P + 3.361 逆对数＝效价 3．判定标准 S/P值效价范围抗体状况 ≤0.499≤1070阴性 ≥0.500≥1071阳性 |
