仅供科研使用，不得用于临床检验。
品牌：YANKOBIO
【检验原理】
采用酶联免疫竞争法检测样本中孕酮（P）含量。首先用羊抗兔包被微孔板，制成固相二抗，然后加入待测样本、辣根过氧化物酶标记孕酮（P）以及抗孕◇酮（P）抗体，使之形成包被二抗-抗孕酮（P）抗体-孕酮（P）（HRP）复合物，标记孕酮的结合量与样本中的孕酮量成反比。经显色后在酶标仪测定吸光值(OD值)，通过计算机↘或作图拟合浓度－吸光度曲线，反算出待测血清中孕酮（P）含量。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南》。所有样本采集过程中，不Ψ 得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心▃。。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中】避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离╱出血清，保存在- 20℃以下，避免『反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为∞抗凝剂※。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本保存和ζ 稳定性
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完】，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样○品均匀充分解冻。
【检验方法】
操作程序
1.将各种试剂移至室温平衡半小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水1：20稀释，混匀后备用︽。
2.将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品依次各∏设两3.孔，每孔加入相应校准品50μl；其余每个检测孔直接加质控品¤或待测样本50μl。
4.每孔加入酶标抗原50μl（空白对照孔除外），再按同样的顺序每孔加入抗体50μl，充分混匀，贴上封◣板膜，置37℃温育1小时。
5.手工洗板：弃去孔内液体，洗涤╳液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗╲板后拍干。
6.每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混①匀后，置37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。
7.用酶标仪读数，单波长酶标仪需先用空白对照孔调零点，然后№测定各孔吸光值。
【实验结↓果计算】
1、双波长酶标仪可以不设空白★对照孔，也无需调零点。单波长酶标仪必须设空白卐对照孔，先用空白对照孔调零，然后测量。如※没有调零，则各孔『吸光值均需减去空白对照孔的吸光值。
2、计算百分结合率：用校准品或样品的OD值除以S0的OD值，为百分结合率。
3、手工作图：用百□分结合率对数（logit-ln）坐标纸，以校∑准品浓度为横轴，以对应的百分结合率为纵轴，画出平卐滑直线，在曲线上按照待测血清百结合率找到浓度值。
4、计算机：由电脑计算出其浓度。
【产品性能指标】
1.外观和物理检查：液体组分应澄清，无沉淀◤或絮状物；所有组分应无包装破损。各组分装量应符合●要求。
2.准确性：在血清中添加高、中、低⊙三个浓度的孕酮制成样品，以试剂盒校准品进行分析测定，用百分结合率々对数（logit-ln）拟合，要求回收率在85.0%～115.0%之间。
3.线性：用Logit-ln数学模型拟合，在0.2～20.0ng/ml范围内，剂量-反应曲线相关系数（r）的绝对◥值应不低于①0.9900。
4.精密度：批内精密度（CV%）应不高于15.0%；批间精☆密度（CV%）应不高于15.0%。
5.最低检出限：试剂盒最低检出限应不大于0.2ng/ml。
6.特异性：
与孕酮（P）、双氢睾酮（DHT）、雌二醇（E2）没有显著交♀叉反应。配制高浓◣度P、DHT、E2的溶液，测量结果应符合下表。
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反应因子 |
配制浓度 |
测量值 |
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P |
100 ng/ml |
≤00.2ng/ml |
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DHT |
10 ng/ml |
≤0.2ng/ml |
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E2 |
10 ng/ml |
≤ 0.2ng/ml |
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【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物↓都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上『呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。
技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时⌒ ，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时☆间，和充分ξ的洗涤步骤▼，是保证实√验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失♂效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底〗物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的♂板条，应立即放回自封袋『中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组ξ分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未◥使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实】验的类型和危险性级别，进行废◥物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。
