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【检验原理】

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附⊙检测技术▃。特异性抗▓小鼠VEGF R2单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入▲标准品、待测样本和▼生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的VEGF R2与固相抗体和检♀测抗体结合。洗涤去〗除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-HRP)。洗涤后，加入『显色底物TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中VEGF R2的浓度成正比】。加入终止液终止反应，在450 nm波长(参考波长570 -630 nm)测定吸光度值。

【检测步骤】

检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室温。

1.准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。

2.将不需要的板∩条拆卸下来，放回装有干燥剂的铝箔袋，重新封←好封口。

3.加入300 μl1×洗液◤静置浸泡30秒。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后，在吸水纸上将╱微孔板拍干。洗板◣完成之后，请立即使用微孔板，不要〒让微孔板干燥。

4.复孔加入100 μl2倍倍比稀释的标准品。空白孔复孔加入100 μl1×检∏测缓冲液。

5.样本孔加入100 μl预稀释的样本。

6.每孔加入50 μl稀释的检测◆抗体。保证步骤4、5、6连续加样，不要间断。加样过●程在15分钟内完成。

7.使用封板膜封板。300转/分钟振荡，室温孵育2小时。

8.弃掉液体，每孔加入300 μl洗液洗板，洗涤6次。每次洗板，在吸水纸上拍干。为获得理＠想的实验性能，必须彻底移除残留液体。

9.每孔加入100 μl稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

10.使♀用新的封板膜封板。300转/分钟振荡，室温孵育45分钟。

11.重复步骤8。

12.每孔加入100 μl显色底物TMB，避光，室温孵育5 -30分钟。

13.每孔加入100 μl终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀，请轻轻叩击板框♀，充分混匀。

14.在30分钟之内，使用酶标仪进行双波长检测，测定450 nm最大吸收波长和570 nm或630 nm参考波长≡下的OD值。校准后的OD值为450 nm的测定值减去570 nm或630 nm的测定值。仅使用450 nm测定会导致OD值偏高，并且准确度降低。