甘油分析仪

一、检测原理

利用生物酶只能催化一种或一类底物的性质，将甘油氧化酶进行固定化处理，样本中的甘油在甘油酶膜的作用下被催化生成过氧化氢，根据电化学的原理，过氧化氢的浓度与电压值正相关，根据☆标准液、缓冲液的电压值响应值来确定样本中甘油浓度

甘油浓度与电压值相关性分析

二、应用案例

（1）甘油在基因表达中的作用

毕赤酵母 ( Pichia pastoris) 作为一个々越来越重要的表达系统，已成功应用于数百种〒外源蛋白的高效表达。 其表达外源蛋白的发酵过程一ω　般有三个阶段：甘油相批培养 (glycerol batch culture) 、甘油☆流加培养 (glycerol fed2batch culture) 和外源蛋白表达又称为甲醇流加诱导培养 ( methanol fed2batch cul2ture) 阶段。 甘油流加培养阶段非常重要，一方面是为了是菌体在诱导前○达到一定的酵母细胞生物※量 ,另一方面是通过限制流加甘油补料，消耗批培养产生【的如乙醇乙酸类 AOX 酶抑制剂的代谢↘物，从而有利于 AOX 酶启动子的诱导 ，为甲◤醇诱导作准备 ,使细胞从甘油相顺Ψ 利向诱导相过渡。

（2）准确检测甘油浓度的重要性

甘油▆补入速率的控制往往是一大困难 ,过慢补料使菌维持菌体所需能量相对增加 ，细胞生长减慢 ;补料过快则使得补入的碳△源极易产生代谢物在发酵液中ㄨ积累 ,有毒性 ,并且 ,高浓度的甘油还会抑制细胞生长。 另外 ，甘油相的补料时间最少得 1h ,也可在通过长时间甘油补□　料增加诱导起始细胞生物量，但是过高的细胞密度会引起ζ　细胞死亡率和蛋◆白酶增多，影响目的◎蛋白产量。

不同甘油浓度下的细『胞湿重和OD值

甘油常作为共基质，在¤甘油激酶、甘油磷酸脱氢酶和丙糖异构酶的作用下，转化为︽甘油醛-3磷酸，进入糖酵解途径并最终生成丙酮酸卐，其理论反应途径比葡萄糖更短，转化「效率更高。甘油还可以作※为可溶性酶体系的溶剂，使得脂肪酶活◥力更高、活性更稳定。在谷氨酸发酵时添加甘油，发现甘油不是▼作为碳源，而是作为保护剂增强细胞对环境的抵抗力和维持关键酶的活性，提高发酵的稳定性。

无机盐发酵培养基中的甘油浓度为 40 g/ L,实验证明在←摇瓶和发酵罐中初始培养基中甘油浓度降低至 5 g/ L ,待甘油耗尽后及时补料 ,能很大程度上缩短毕赤酵母延滞】期 ,促进毕』赤酵母生长。补料分批发酵 ,培养基中甘油积累到※一定程度会造成底物反馈抑⊙制 ,使毕赤酵母生长速度放慢甚至停止生长 ,所以在流加过程中要控制甘油补加速度 ,使培养基中甘油浓度在限制性浓度以下。可以根据甘油分析仪的检∏测值 ,通过调节补料速度来精确控制甘油浓度。

（3） 在酿酒工业中的应用

葡萄酒是以葡萄为原料，经发酵酿制而成的发酵酒。在葡萄发酵过程中，会产◣生乙醇、甘油等物质。甘油让葡萄酒有一定的甜度，口感厚重圆润。甘油≡和乙醇的相对含量，受制于酿制工艺，是影响葡萄酒品质的重要因素。因此，可通过检测其甘油和乙醇含〇量来优化酿制工艺，提高【葡萄酒的品质。

葡萄酒样品 1 2 3

酒精度，体积分数% 12.4 12.0 12.6

甘油，体积分数% 0.79 0.70 0.82