产品名称：无内毒素质粒小量提取试剂盒
英文名称：Endo-Free plasmid mini kit
包装规格：
|
产品编号 |
产品规格 |
价格 |
|
TK06073 |
50次量/盒 |
询价 |
|
TK06077 |
200次量/盒 |
询价 |
有效期：本产品在常温(15-25℃) 干燥条件下可保存12个月。
产品原理和特点：
无内毒素质粒小量提取试剂盒使用无胍盐质粒纯化方法，最高可以获得高纯度的质粒50 μg，操作方便；过滤柱除去内毒素，使内毒素浓度<0.1 EU/µg；没有盐离√子残留，提高测序、连接、转化和酶反应效率。
使用前准备ζ 事项：
1、使用本产品前，请务必仔细阅★读说明书；
2、EFW(70%乙醇)在首次『使用前加入42 mL无水乙醇，混匀后使用；
3、Buffer RA在首∞次使用前加入RNase A，2-8℃保存。
4、检查BufferRB 有无沉淀。如有混浊现〓象，可在37 ℃水浴︽中加热至澄清；
5、全部操作均在室温进行，低温离♀心不利于酶去除 RNA；
6、从步骤“10”起，使用新的无内毒素的枪头转移〓液体并小心操作，可避免引入新的内毒素污Ψ染物。
操作步骤：
1、取大肠杆菌←过夜培养液 1~4mL，12,000 rpm室温离心 1 min，弃上清收集菌◣体。
2、向菌体中加入溶液 RA 200 µL，涡旋振荡，充分混悬菌【体。
*不要残╲留菌块，会影响质粒得率和纯度。
3、加入溶液 RB 200 µL，立即温和上下颠倒5-7次，使之充分混◆匀，室温静置3min，形成透明溶液。
*不操→作不可剧烈，以免震断细菌基因组DNA；也不可超过5 min，以免卐破坏质粒完整性。
4、加入溶液 RC 200 µL，立ω即温和地上下颠倒 5~7 次，使之〒充分混匀。加入100 µL无水乙醇，颠倒混匀。12,000 rpm室温离心10 min。
5、将上清全部转移至套有过滤柱的结合柱中。12,000 rpm 室温离心 2 min，弃滤液。
6、将结合柱放↙回，向结合柱内加650 μL80%乙醇（自备），12,000 rpm室温离心1min，弃滤液。
7、将结合柱放回，12,000 rpm室温离2 min，除去结合柱内残∏留液体。
8、将结合柱放入◆新的1.5mL离心管中，敞口室温放置5~10min 使乙醇Ψ 充分挥发。
*残留乙醇◤将严重影响 DNA 洗脱。
9、向结合中加200μL Elution Buffer，室温静置2~3 min，12,000 rpm室温离心1min，弃掉︾结合柱。
*将Elution Buffer预热至60 ℃左右，可↓以增加洗脱效率。
10、向洗脱」液中加入BufferRE 200 μL，颠倒混匀，室温静置5 min。
11、加入Buffer NE 140 μL，颠倒混匀，并移入Endo-free过滤柱中，静置5~10 min。12,000 rpm室温离心2min，弃过滤柱。
*静置5~10 min可使絮状物分层，利于过滤。弃过滤柱前∞，确认无液体残留，否则再次离心过滤。
12、向滤液中加入等体积的异丙醇（或者两倍体积的无☉水乙醇，自备），颠倒混匀后室温放置15min，10,000 rpm离心15min，弃上清。
13、加入500 μL EFW(70%乙醇)洗涤沉淀，12,000 rpm室温离心5min，弃上清。
14、重复步骤“13”，尽可能弃上清。
15、敞口放置 5~10 min，使乙醇◇挥发，用适量EFW溶解沉淀。
常见问题解析：
质粒得率低可能原因及解决办法：
1、菌体未←活化，生长〖效率低，菌量少，需要活化菌种；
2、属于低拷贝质粒。增加菌液→的量∩；
3、BufferRB 裂解不充分。
质粒纯度差可能原因：
1、未加入RNase A 或RNase A未4℃保存；
2、加入Buffer RB 剧烈震荡，使得基因组断裂；
3、加入Buffer RC操作慢，形成微小沉☆淀，蛋白质无法被充分漂洗干净；
4、OD260/OD280 比值一般在 1.8-2.0 之间，小于 1.8 可能有蛋白污染，大于 2.0 有部分降解或 RNA 污染。
同科生物10年来一直致力于生命医学和生物技术领域的积累与沉淀，目前同科生物实验室占地约8000多平米，技术研发团队50余人，配备了先进的分析和检测设备，我们通※过自主创新以及与国内外的科研单位合作研发，不断突破新技术，质量成熟，各类产品和技术服务赢得了众多科研机】构的认可。
