小鼠抗核抗体(ANA)ELISA Kit
简介:
ELISA试剂盒检测范围:
人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。
小鼠抗核抗体(ANA)ELISA Kit
操作步骤:
1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2)根据待测样品数量加上标准品∮的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。 每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本〓稀释液1:1稀释后加 入50ul于反应◢孔内。
3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待◥测样品50ul于反¤应孔内。立即加入50ul的生物 素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4)甩去孔内液体,每孔↑加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗◆涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3 次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数≡增加一次。
5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入▲终止液后应立即测定结果。
9)在450nm波长处测定各孔的OD值。
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
1. 灵敏度:***小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
辨别“鼠ELISA试剂盒"优劣的方法:
1. 选定一个检测范围内的浓度做多孔重复,可看出平行性好不好。即板内CV值的大小,此操作时需要小心加样的准确性。对一些制作较粗糙的试剂盒来说,
板间CV值是较大的。
2. 可采用已知浓度的重组细胞因子,稀释到检测范围内作为样本加入,看检测的准确性。
3. 对用待测指标的重组细胞因子做试剂盒说明书⌒上标定的最小浓度稀释,可测出灵敏度,建议5个复孔以上才有意义。一般厂家以20个复孔做出的结果作为
检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的∑ 灵敏度是否如说明书所述,也可判断出所购试剂盒是否有夸大之说。
4. 如果有相同指标的进口试剂盒,可用对方的标准品作为样本,分别加入各自的试剂盒做检测,以检测试剂盒的真实性,准确性。如其中一种是知名的,比
较可靠的话,可作为标准来验证另一试剂盒的准确程度。
小鼠抗核抗体(ANA)ELISA Kit
ELISA试剂盒"实验操作程序(具体请参照说明书):
① 加抗体包被 → 4℃,洗涤三次、抛干
② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 15分钟,加终止液
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