组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒
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货号 |
规格 |
价格 |
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N1141 |
50次 |
485 |
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N1142 |
100次 |
875 |
产品组分
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组分 |
货号 |
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N1141 |
N1142 |
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消化缓冲液DS |
15 ml |
30 ml |
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裂解液MS |
20 ml |
40 ml |
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蛋白酶K |
1 ml |
2 ml |
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去蛋白液PS |
30 ml |
60 ml |
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漂洗液PE |
15 ml |
30 ml |
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纯化液TE |
5 ml |
10 ml |
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DNA纯化柱 |
50个 |
100个 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
注： 裂解液MS有轻微腐蚀〓性,请不要直接接触。
漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
保存条件
蛋白酶K于-20℃保存。
其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下〗保存1年。
消化缓冲液DS如有沉淀，在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用ㄨ。不会影响基因组DNA纯化效率。
产品说明
本产品用于多种动物组织（新鲜或冻存▓）与培养细胞等样本的基因组ΨDNA的纯化。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅◎胶膜柱可逆
吸附基因组︽DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖〓等杂质后，用纯化〗液洗脱获得基因组DNA。本产品可从∩不超过10 mg组织材料或不超过1×106-107
培养细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA（OD260/OD280 = 1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。
产品特点
产品用途
质量控制
纯化♂的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷卐基因的PCR扩增鉴定。
基因组DNA提取流程图
图1 基因组DNA纯化流程图
操作方法
1 材料处理
[动物组织]
取少量样↙本材料，放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮，直至⌒样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中，每管组
织材料含量应不超过10 mg。
注： 某些匀浆困难，或在匀浆过程中DNA容易㊣ 降解的特殊组织应加液氮研磨。如DNA酶含量丰富的组织：肝脏、脾脏、胰腺、胸腺、淋巴等；胶原蛋白含量丰富的组织：皮
肤、肌腱等；角质蛋白含量丰富或坚硬的组织：骨骼等。
如没有液氮。可用用剪刀剪成小块，放入研钵或匀浆器中，加入适量TE（pH 8.0），处理成细胞悬液。将不超过10 mg当量的细胞悬液转移至一个新的1.5 ml的离心管①中，
12000 rpm离心1min，弃上清，收集沉淀。
每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样↑本材料可获得10 μg基因组DNA。样本☉量过大，将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱，进而降低基◣因组DNA的得率
与纯度。
[细胞]
贴壁细胞：先用胰酶将贴壁细胞处◥理成细胞悬液，转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min，弃上清。
悬浮细胞：直接取∴适量转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min，弃上清。
注：每只离心管内的细胞量不应超过1×106-107。
2 加入200 μl消化缓冲液DS，漩涡振荡直至形成完全均一的悬浮液。
注：如需去除RNA，可加入4μl RNase A（100 mg/ml），振荡混匀。室温放置5min。
3 加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS，漩涡振荡╱混匀▓。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失※，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解☆不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不
纯。
如果是比较致密难裂解的组织，可先加蛋白酶K混匀后，55℃温浴至〖完全溶解。再加MS混匀，65℃温浴10min。
4 加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀，将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min，弃滤液。
注：此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。
5 加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗』脱，以获得高质量基因组DNA。
6 加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
7 加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
8 12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。
注：此步骤的↑作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促【反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。
9 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱」中央处，悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2min。12,000 rpm离心2min，管底々即为高纯度基因组DNA。
-20℃保存。
注：洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。
对洗脱液TE 60℃预热，会提▆高基因组DNA的产量。
图2 基因组DNA电泳图
注意事项
1 应尽△量使用新鲜的实验材料，确保提取的基◆因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-70℃冰箱中保存并避免反复冻融。
2 使用液氮研磨组织材料时，应随时加⌒入液氮，确保提取的基因组DNA不被降解。
3 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。分装后保存于-20℃或-80℃。
基因组DNA的浓度及纯度检测
1 基因组DNA 片段的大小与样品保●存时间◢、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得¤到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓ξ度与纯
度。
2 DNA 应在OD260 处有显著吸ξ收峰， OD260 值为1 相当々于大约50 μg/ml 双链
DNA、40 μg/ml 单链DNA。
3 OD260/OD280 比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用纯化液TE，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响☉光吸收值，但并不表示纯度低。
