血液基因组DNA提取试剂盒
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货号 |
规格 |
价格 |
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N1121 |
50次 |
440 |
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N1122 |
100次 |
785 |
产品组分
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组分 |
货号 |
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N1121 |
N1122 |
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红细胞裂解液RS |
80 ml |
80 ml×2 |
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消化缓冲液DS |
15 ml |
30 ml |
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裂解液MS |
20 ml |
40 ml |
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蛋白酶K |
1 ml |
2 ml |
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去蛋白液PS |
30 ml |
60 ml |
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漂洗液PE |
15 ml |
30 ml |
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纯化液TE |
5 ml |
10 ml |
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DNA纯化柱 |
50个 |
100个 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
注： 裂解液MS中含有变性剂，请不要直接接触皮肤。
漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
保存条件
蛋白酶K于-20℃保存。
其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。
如消化缓冲也DS有沉淀，在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。
产品说明
本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理〓是首先利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*，细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱
可逆吸附体系内的基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。
本产品适用于未凝固全血，以及经各种抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸）处理过的全血样本。一次可从0.4 ml全血中提取到3-10 μg高纯度基因组DNA
（OD260/OD280 =1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。
*本产品不能从全血中直接提取DNA，要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA，建议选择Quick血液基因组DNA提取试
剂盒（东盛）。
产品特点
产品用途
质量控制
纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。
血液基因组DNA提取流程图
图1 血液基因组DNA纯化流程图
操作方法
1 取血液样本，每400 μl血液加入到一只1.5ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。5,000 rpm离心3min，弃上清，收集
白色或淡红色沉淀。
注：如沉淀仍然呈深红色，表明红细胞裂解不充分，可再加500 μl红细胞裂解液RS处理一次。
对于哺乳动物全血，每400 μ全血中可提取3-10 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA，因其血液中红细胞有细胞核，血液用量勿超过
20 μl/离心管。每20 μl全血中可提取40 μg的基因组DNA。
2加入200 μl消化缓冲液DS，旋涡振荡直至完全分散。
注：如需去除RNA，加入消化缓冲液DS后，再加入4μl RNase A（100 mg/ml）溶液，震荡混匀，室温放置5min。
3 加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS，漩涡振荡※混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入裂解液MS时可能会产生白⊙色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不
纯。
4 加入220 μl无水乙醇，上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀，将溶液及絮状沉全部淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。
5 加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱，以获得高质量基因组DNA。
6 加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
7 加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
8 12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。
注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。
9 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2min。
10 12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。
注：洗脱液TE可用▆去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视■质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。
对洗脱液TE 进行60℃预热，会提高基因组DNA的产量。
图2 基因组DNA电泳图
注意事项
1 柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求，请使用柠檬酸或EDTA处理血样。
2 基因组DNA的得率，会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。
3 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。
基因组DNA的浓度及纯度检测
1 基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯
度。
2 DNA 应在OD260 处有显著吸收峰， OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链
DNA、40 μg/ml 单链DNA。
3 OD260/OD280 比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用纯化液TE，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
