基因组DNA快速提取试剂盒
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货号 |
规格 |
价格 |
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N1111 |
50次 |
440 |
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N1112 |
100次 |
785 |
产品组分
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组分 |
货号 |
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N1111 |
N1112 |
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消化缓冲液DS |
15 ml |
30 ml |
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裂解液MS |
20 ml |
40 ml |
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蛋白酶K |
1 ml |
2 ml |
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去蛋白液PS |
30 ml |
60 ml |
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漂洗液PE |
15 ml |
30 ml |
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纯化液TE |
5 ml |
10 ml |
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DNA纯化柱 |
50个 |
100个 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
注：裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。
漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
保存条件
蛋白酶K于-20℃保存。
其余试Ψ 剂置于室温（15-25℃）干燥条件下ㄨ保存1年。
如果消化缓≡冲液DS和MS中沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯♂化效率。
产品说明
本产品可用于昆虫、线虫、动物等样本的基因组DNA纯化。纯化原理是利用细胞裂解液裂解〖细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附体系中的基因组
DNA，经蛋白酶K消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质，用纯化液洗脱获得基因组DNA。一次可从不超过10 mg组织材料中々提取到3-35 μg的
高纯度基因组DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切︽等后续实验。
产品特点
产品用途
质量控制
纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。
基因组DNA提取流程图
图1 基因组DNA纯化流程图
操作方法
1 取少量样本材料，放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮，直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中，
每管组织材料含量应不超过10 mg。
注：如没有液氮。可用用剪刀剪成小块，放入研钵或匀浆器中，加入适量TE（pH 8.0），处理成细胞悬液。将不超过10 mg当量的细胞悬液转移至一个新的1.5 ml的离
心管中，12,000 rpm离心1min，弃上清，收集沉淀。
每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10 μg基因组DNA。样本量过大，将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱，进而降低基因组
DNA的得率与纯度。
2 加入200 μl消化缓冲液DS，漩涡振荡至形成完全均一的悬浮液。
注：如需去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml），振荡15秒，室温放置5min。
3 加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS，漩涡振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的
DNA 不纯。
如果是比较致密难裂解的组织，可先加蛋白酶K混匀后，55℃温浴至完全溶解。再加MS混匀，65℃温浴10min。
4 加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心
1min，弃滤液。
注：此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。
5 加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量基因组DNA。
6 加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
7 加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
8 12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。
注：此步骤的作用是去㊣ 除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因〓组DNA充分溶解。
9 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。
10 12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。
注：洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。
对洗脱液TE 60℃预热，会提高基因组DNA的产量。
注意事项
1 应尽量使用新鲜的实验材料，确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-70℃冰箱中保存并避免反复
冻融。
2 使用液氮研磨组织材料时，应随时加入液氮，确保提取的基因组DNA不被降解。
3 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。分∩装后保存于-20℃或-80℃。
基因组DNA的浓度及纯度检测
1 基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的︻剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和☆紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2 DNA 应在OD260 处有显√著吸收峰，OD260值为1 相当于大约50μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。
3 OD260/280比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用纯化液TE，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
