鼠尾胶原蛋白

	鼠尾胶原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen1 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。 鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实⊙的生长环境，使细胞在三维环境中生长〓。
使用 Birkedal-Hansen1的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备。 在 1mg/ml 浓度以上可形成具有一定强度的三维胶，可用于细胞的三维空间培养 。 通过在包被的培养器皿中培养 PC-12 细胞、在三维胶原中培养 NIH-3T3 细胞实现质量控制 。 电泳结果和 Sigma 的同类产品无显著区》别 。 产品为无菌的溶液，省去从干粉配制的麻烦 。 在无尘车间中生产，保证洁净度 。

使用方法：

1、细胞培养器→皿的表面包被 推荐浓度： 1-5ug/cm²

以包※被浓度为 2 ug/cm² 为例：用无菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按表 (一)体积加到相应的培养器皿中：

表 (一)

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温◣放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直□接使用。

包被好的器皿在 4-25℃至少↓可保存3个月以ω上的时间。

2、三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形№成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度◣1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加卐入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

需要的↓溶液 ( 均需要 无菌 、 预冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 )或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 双蒸水

A．不含细胞的三维♂胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为①例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于『冰浴的离心管中，加入690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果ぷ反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原⌒溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局」部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul 10xPBS或10x培养液，混匀〖后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培】养液中没有加酚红，初次∩使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移⊙到培养箱内。如果配制中使用的ㄨ是10xPBS，使用前需□要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B．含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来◣把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul 10xPBS或10x培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要☆用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下◤放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。

注：鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保☆持低温。