QIAamp DNA Blood Midi Kit
从血液和相关体液中纯化基因组DNA、线粒体DNA或病毒DNA,最高可达60 μg
快速纯化高品质、即用型DNA
无需有机提取或乙醇沉淀
重复性好,产量高
完全去除污染物和抑制剂
QIAamp DNA Blood Midi Kits应用硅胶模△技术,用于实验室从全血、血浆、血清和其它体液中纯化DNA。QIAamp DNA Blood Midi Kit可处理0.3–2 ml新鲜或冷冻的人类全血。QIAamp Midi离☆心柱可在离心机或真空装置上处理(使用真空管需要额外的缓冲液AW1 [货号:19081]和AW2 [货号:19072] )。
QIAamp Spin Column实验流程。
采用优化的缓冲液裂解样本、稳定核酸并增强DNA在QIAamp膜上的选√择性吸附。加入乙醇,并将裂解物上样于QIAamp离心柱。使用洗涤缓冲液去〓除杂质,然后用水或低盐缓冲液洗脱纯的即用型DNA。
性能
QIAamp DNA Blood Kits根据样本存储条件和新鲜程度不同,可纯化获得200 bp–50 kb的DNA(参见Apoptotic banding in stored blood)。纯化的DNA适用于长片段PCR扩增(参见Long-range PCR)和RFLP分析等等,如亲子鉴定(参见Paternity testing by RFLP analysis)。
使用QIAamp DNA Blood Midi Kit获得DNA的回收率可高达94.5%,依初始细胞密度而定(见表)。
从不同细胞〇密度的人类全血中纯化的DNA产量
白细胞/ ml |
DNA产量(μg) |
DNA回收率(%) |
2.5 x 105 |
3.0 |
92.3 |
1.0 x 106 |
11.0 |
91.7 |
5.0 x 106 |
62.4 |
94.5 |
1.0 x 107 |
116.3 |
88.1 |
从2 ml人类全血中纯化得到基因组DNA,并用300 μl洗脱液洗脱。第一次的洗出液再次上样到离心柱并离心(即:再洗脱)。假设一个白细胞包含6.6 pgDNA,计算DNA回收率。
原理
无需苯酚-氯仿抽提。核酸特异性结合到QIAamp硅胶膜上,污染●物流走。PCR抑制剂,如:二价阳离子和蛋白,可通过两步有效的洗涤被完全去除,结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液洗脱。QIAamp DNA Blood技术从全血或相关体液纯化得到的基因组、线粒体或病毒DNA,可即用于PCR和印迹实验中。
操作流程
QIAamp DNA Blood Midi Kit采用快速离心柱操作简化了从全血或相关体液中分离DNA的流程(参见procedure)。该试剂盒可处ξ 理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全血样本。QIAamp DNA Blood Midi Kit可处理0.3–2 ml的样本,制备时间55分钟。可从1 ml健康全血中获得20–60 μg DNA,洗脱体积100–400 μl。
QIAamp DNA Blood Kits提供全面的『操作手册,包括从不同来源的样本中纯化DNA的操作◇流程。QIAamp样本制备技术已完全经过验证。
应用
QIAamp DNA Blood Midi Kit使用经验证的QIAamp技术,采用带有15 ml收集管的Midi离心柱从不同来源的样本中纯化DNA。样本︼来源包括:
新鲜和冷冻的全血或白膜层
血浆或血清
骨髓
淋巴细胞
体液