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ELISA试剂盒的制备方▓法包括以下步骤:
1)抗原表位的计算机筛选;
2)抗原的制备∑;
3)血清的采集;
4)间接ELISA方法的↘建立;
5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证;
6)试剂盒的稳定性验证;
7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试●剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒,适用于大批量发病样本的检测,可用于猪戊肝的快速诊断,并预防、控制猪戊肝病毒的流行和阻断∮戊肝病毒由猪向人传播。
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双抗体夹心〓法:1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量◥为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一⊙定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入←新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时♂配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 结果判定:可ζ于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度♂越强,阴性反应︻为无色或极浅,依据所呈∑颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定』的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
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