人干细胞因子(SCF)ELISA试剂盒
1. 标本的采取和保存
可用作 ELISA 测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些⊙标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分 ELISA 检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助Ψ于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血▲清作为检测标本。在 ELISA 中血浆和↘血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质∑,以 HRP 为标记的 ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本◥宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性 HRP,也会产生假阳性反应。如在冰♀箱中保存过久,其中的可发生聚←合,在间接法 ELISA 中可使本底加深。一般说来,在5 天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清↑融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻︼缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先□离心或过滤,澄清后再∮检测。反复冻融会使抗体效价※跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐∮剂。
2. 试剂的准备
按试剂盒说明书的要◢求准备实验中需用的试剂。ELISA 中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新╳鲜的和高质量的。自配的缓冲液应●用 pH 计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使』用。试剂盒中本次试验不需用的↘部分应及时放回冰箱保存。
3. 加样
在 ELISA 中一般有3次加样步卐聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在 LEISA 板孔的底部,避免加在孔壁上∏部,并注意不可溅出,不可产生气泡。加标本一般用微量加样器,按规定的量▽加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的△定量塑料管加样。有此测定(如间接法 ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其中加∑入血清标本,然后在微型震荡器上↘震荡 1 分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可▲用定量多道加液器,使加液过程迅速〓完成。
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