大鼠组织相容性抗原(HLA-1)ELISA试剂盒操作步骤:
实验开╱始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样∞品配制时，均需充①分混匀，并尽量避免起泡。
1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样ζ 品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及卐孔壁，轻轻◇晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2、 弃去液体，甩干，每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分钟▼内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4、 每孔加HRP Conjugate工作液（临用前15分钟〗内配制）100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。
5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同」步骤3。
6、 每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不◤可超过】30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。
7、 每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与ぷ底物液的加入顺序相同。
8、 立即用酶标仪□在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
9、 实验完毕后将未用∩完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。
大鼠组织相容性抗原(HLA-1)ELISA试剂盒实验操作注意事项：
1、 保存：试剂盒◤中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强◣光中。所有试剂瓶盖须盖紧或旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。
2、 酶标板：刚开启◣的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
3、 加样：加样或加试剂时，第一〖个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔实验。
4、 温育：为防止样品蒸⌒ 发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定●的温育时间和温度。
5、 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除孔底残留的液体和手指印，以免影响＠酶标仪读数。
6、 试剂配制：Detection Ab及HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前请手甩几下或1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请♀用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液请依据◥所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Detection Ab时，一ぷ次不要小于♀10μl），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分≡装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。
7、 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过》深影响酶标仪读数。
8、 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
9、 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使■用微量振荡器(使用最低频率)，如无微 量振荡器，可在反应前手工轻轻◣敲击酶标板框混匀。
10、 安全：试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工⊙作。特别是检测血液或者其他体液标 本时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
11、 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）
12、 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使♂用，严禁混用，否则将影响试验结果！
大鼠组织相容性抗原(HLA-1)ELISA试剂盒结果判断:
1. 每个标准品和标本的OD值减去空★白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计●算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 推荐使用〓专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可≡用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，然后∏将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓▲度。
3. 若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
