I型原胶原N端前肽 ELISA试剂盒
我公司的相关试剂盒的各种指标齐全涉及范围或分类广泛,具体如下:
人,小,鼠,大鼠,豚鼠,猪,狗,牛,羊,猴,兔,等动物种属
操作步骤:
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样⊙品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意◢不要有气泡,加样将样★品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆▼膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
I型原胶原N端前肽 ELISA试剂盒2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工♂作液 100μl(取1μl生物素标记抗体ζ 加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔↘内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液Ψ体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加▓底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止←液的加入顺序应尽量与底物液的加▅入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪╲在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟︻以内进行检测。
注:
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一』孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测※量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板ξ加上盖或覆膜。
4. 未∏使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量Ψ 配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均△设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法←:吸去(不可〓触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐【的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实◇验过程中。
I型原胶原N端前肽 ELISA试剂盒计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品〖的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物※的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
(注:本试剂只用于科研,欢迎①来电咨询!)