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产品型号：YF2354 (48T/96T)

所在地区：上海

规格： 48T/96T

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说明书以人超氧化物歧化酶（SOD）Elisa试剂盒为例：

人超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中超氧化物歧↓化酶（SOD）的含量。

实验原理：

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人超氧化物歧化酶（SOD）水平。用纯化的人SOD抗体包被微孔板，制成固相抗体■，往包被单抗的微孔中依次加入超氧化物歧化酶（SOD），再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后〗加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成卐最终的黄色。颜色的深浅和样品中的超氧化物歧化酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算】样品中人超氧化物歧化酶（SOD）浓度。

试剂盒↑组成：

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集①上清，保存过〗程中如出现沉淀，应再次离心╲。

2. 血浆：应根据标本的●要求选择EDTA或柠檬∑　酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上⊙清，保存过程中如有沉淀形々成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集＠ ，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过＠程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上◣清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复≡冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切Ψ割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手→工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装〖后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相★关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行▲试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复⌒　冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1.         标准〖品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分☆别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第♀三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔〗和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六∮孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分ω　别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从『第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再∮在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓ぷ度分别为120 mU/L，80mU/L ，40mU/L，20mU/L，10mU/L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不」触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.         配液：将30（48T的20倍）倍浓缩⌒洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀』释后备用。

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加█入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀□，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立〒转黄色）。

11.     测定：以空ㄨ白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液▽后15分钟以内进行。

注意事项：

1．  试剂盒从冷藏环境中取出应在□　室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被卐板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．  浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助∑溶，洗涤时不影响结果。

3．  各步加样均应使●用加样器，并经常校对其准确性，以避免试▲验误差。一次加々样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排¤枪加样。

4．  请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．  封板膜只限一Ψ 次性使用，以避免交叉污染。

6．  底物々请避光保存。

7．  严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．  所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．  本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书◥有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横☆坐标，OD值为纵坐▼标，   

在坐∞标纸上绘出标准曲线，根据样品≡的OD     

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释     

倍数；或用→标准物的浓度与OD值ζ　计算出标     

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值     

代【入方程式，计算出︼样品浓度，再乘以稀释      

倍数，即为样品的实际浓度。                 

（此图仅】供参考）

试剂盒性◇能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

检测范围：                                             

3mU/L - 160mU/L                                        

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

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