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产品型号：YF6826 (48T/96T)

所在地区：上海

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规格： 48T/96T

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说明书≡以人载脂蛋白E（APO-E）ELISA试剂盒 为例：

人载脂蛋白E（APO-E）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中载脂蛋白E（APO-E）含量。

实验原理：

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人载脂蛋白》E（APO-E）水平。用纯化的人载脂蛋白E（APO-E）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入载脂蛋白E（APO-E），再与HRP标记的载脂蛋白E（APO-E）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物▃，经过彻底洗涤后加底→物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的载脂蛋白E（APO-E）呈正相关。用酶标↑仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人载脂蛋白E（APO-E）浓度。

试剂盒♂组成：

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上⊙清，保存过∑　程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上〓清，保存过程中如╲有沉淀形成，应该︽再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细『收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参①照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收←集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使Ψ细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本〖融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工№或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤

1.       标准卐品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从☆第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第↑四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加ω到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后〗从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品〓稀释液50μl，混匀后从第七、第ω　八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔◤分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为150ng/ml，100ng/ml ，50ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml）。

2.       加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品∞10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁∩，轻轻晃动混匀。

3.       温育：用封板」膜封板后置37℃温育30分钟。

4.       配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用♀蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5.       洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.       加酶：每孔加入酶标试剂∏50μl，空白孔○除外。

7.       温育：操作同3。

8.       洗涤：操作同5。

9.       显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.    终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄□色）。

11.    测定：以空白空调零，450nm波长依序〖测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项：

1．  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使¤用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．  浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时√可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．  各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．  请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一々孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交♂叉污染。

6．  底物请避光保存。

7．  严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以☉酶标仪读数为准.

8．  所有样品，洗涤液※和各种废弃物都应按传染物处理。

9．  本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，   

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品≡的OD     

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释     

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出」标     

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值      

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释     

倍数，即为样品的实际浓度。                 

（此图仅供参考）

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

检测范围：                                             

5 ng/ml –200ng/ml                                      

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

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