| 热休克蛋白60抗体(Hsp60 IgA/IgG/IgM) Elisa kit |
,规格：48T/96T
上海逸峰生物试剂有限公司←长期提供各种种属、各种系列Elisa检测试剂盒，价格实惠，质量有保证,信誉第一。欢迎来电索取各Elisa试剂盒产品说明书。凡购买目录本公司Elisa试剂盒可免费提供代测服务。
Elisa试剂盒说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．刚开启的酶联板孔中可能会含＠有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
4．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明＠ 书为准。
Elisa试剂盒实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗LEP抗体的微♀孔中依次加入标本或标准品、生物素化的ω抗LEP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的︻作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的LEP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
Elisa试剂盒标本的稀释原则：
首先通过文献检索▲的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准▓品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10ng/ml，做系列倍〖比稀释后，分别稀释10 ng/ml，5 ng/ml，2.5ng/ml，1.25 ng/ml，0.625ng/ml，0.312ng/ml，0.156 ng/ml.
，样品↘稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制5ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）10ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此〓类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实∩验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制◢时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配∏制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶√标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实♂际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
Elisa试剂盒需要■而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温◆培养箱
4. 干净的试管和①Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道ω 移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的∑采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放】置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应√避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素㊣ 作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标●本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血々标本不宜进行此项检测。
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间☉最好控制在5分钟内，如标■本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好◥做复孔。
5. 如标本中待测物质含量ㄨ过高，请先稀释∴后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液←工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避〇光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试∩剂。
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