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D1200 (50T)
详细说明
产品说明:
本试剂盒采用可以高效、专一结合的DNA硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100bp-10kb大小的片段,回收率大于80%(小于100bp和大于100kb的DNA片段回收率为30-50%)。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等试验。注意事项:在使用本试剂盒前请阅读此注意事项。
1. 电泳前最好更换成新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
2. 如下一步实验要求较高,则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
4. 回收小于100bp和大于100kb的DNA片段时,应加大溶胶液的体◣积,延长吸附和洗脱的时间。
5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越小,回收◆率越低。
6. 如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤: (使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。)
1、琼脂糖凝胶电泳后,将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切ω 下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管中,称取重量。
2、向胶块中加入3倍体积溶胶液(如果凝胶重为0.1g,其体积可视为100ul,则加入300ul溶胶液),50-55℃水浴放置10min,期间不断温和地↙上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。
注意:溶胶时,如果溶胶液◥变为红色(正常情况下为淡黄色),可向含有DNA的胶溶液中加入10-30ul 3M醋酸钠(pH5.2)将胶溶液调为淡黄色,否则将会影响DNA与吸⊙附柱的结合,影响回收效率。
3、将上一步所得溶液加入一个吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放入收集管中。
注意:胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸
附柱放入收集管中。
5、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放○入收集管中。
6、12000rpm离心2min,尽量除〖去漂洗液。将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置←数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,防止漂洗液中的乙醇影响后续的实验。
7、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加适量经65℃水浴预◣热的洗脱液,室温放置2min,12000rpm离心1min。
注意:1)、为了增加回收效率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,12000rpm再次离心1min。
2)、洗◤脱缓冲液体积不应少于30ul,体积过小影响回收效率。
3)、洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若用¤水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。
8、DNA产物-20℃保存。
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