产品简介：
Cell Counting Kit 简称CCK-8 试剂盒，为MTT 法的替代方法，是一种▓基于WST（水溶性四唑盐，化
学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞
毒性的快速高』灵敏度检测试剂盒。CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
操作说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
1、先用︽细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2 比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度「，一般要做3-5 个细胞浓度梯度，
每组3-6 个复孔。
3、接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加CCK 试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X 轴），OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲▆线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数
量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK 后的培养时间。）
二、细胞活性检测
1、在96 孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板〓放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2 的条件下）。
2、向每孔加入10 μL 的CCK 溶液（注意不要№在孔中生成气泡，它们Ψ 会影响OD 值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
4、用酶标仪∮测定在450nm 处的吸光度卐。
5、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以⊙向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS
溶液，并遮盖培养板避光保存在室温※条件下。在24 小时内吸●光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测
1、在96 孔板︻中配置100μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时（在37℃，5% CO2 的条件下）。
2、向培养板加入10μL 不同浓度的卐待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或48 小时）。
4、想每孔加入10μL CCK 溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
6、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。
7、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每▲孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS
溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培◥养基
洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的【情况下，可以不更换培养基，
直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
备注：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK 试剂后的○培养时间。
②有条≡件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK 试剂时，建议斜贴着培养
板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气∮泡，会干扰OD 值读数。
③白细胞可能需要培养较长时间。
④当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵
敏¤度相对较低，因此推荐接◢种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24 孔板或6 孔板实验，
请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK 溶液。
⑤如果没有450nm 的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之☆间的滤光片，但是450nm 滤光片的检测灵
敏度最高。
⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而∩消去，因此不会对〓检测造成影活力计算：
细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0 加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0 加药）：具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活∏力
保存条件：
4℃干燥避光保存，有效期一年
