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产品名称:牛α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA Kit
检测方法:ELISA
检测类型:酶免免疫夹心法∑
检测范围:见说明书
灵敏度:见说明书
样品形式:血清/血浆/细胞培养上清/其它生物液体
保存与运输〓:短期4℃/长期-20℃保存
应用范围:科研用检测试剂
操作步骤
实验开始㊣ 前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时●尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再〓乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆※膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一▓小时内配制),酶标板加Ψ 上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体∞拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标▅板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时∞蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快ζ 加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后立即进行检测。
注:
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按○照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样或加试剂时,请注意︽在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大∏,将会导致不同的 “预孵育”时间,从而¤明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)最好控制在10分钟内,如标本数量多▆,推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于╲铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格№遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消卐除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。
5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心↘处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要卐小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准ζ 品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观◤察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜↑色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接●照射。
建议检测样品时□均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。
洗板方法
1. 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的【液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标◣板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
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