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                教育装备采●购网
                第六届图书馆︻论坛580*60

                人胃肠癌标志物(CA199)酶联免∮疫分析

                教育装备采购网 2020-02-14 13:45 围观505次

                  人胃肠癌标志物(CA199)酶←联免疫分析

                  本试■剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中胃肠癌标志物(CA199)含量。

                  实验原理:

                  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胃肠癌标志物(CA199)水平。用纯化的胃肠癌标志物(CA199)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胃肠癌标志物(CA199),再与HRP标记的胃肠癌标志物(CA199)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过♀彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成╳ 终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃肠癌标志物(CA199)呈正相关。用酶标仪在450nm波ξ长下测定吸光度(OD值),通∮过标准曲线计算样品中人胃肠癌标志物(CA199)浓度。

                  试剂盒组成

                试剂盒组成

                48孔配置

                96孔配置

                保存

                说明书

                1份

                1份


                封板膜

                2片(48)

                2片(96)


                密封袋

                1个

                1个


                酶标包被板

                1×48

                1×96

                2-8℃保存

                标准品:9U/ml

                0.5ml×1瓶

                0.5ml×1瓶

                2-8℃保存

                标准品稀释液

                1.5ml×1瓶

                1.5ml×1瓶

                2-8℃保存

                酶标试剂

                3 ml×1瓶

                6 ml×1瓶

                2-8℃保存

                样品↑稀释液

                3 ml×1瓶

                6 ml×1瓶

                2-8℃保存

                显色剂A液

                3 ml×1瓶

                6 ml×1瓶

                2-8℃保存

                显色剂B液

                3 ml×1瓶

                6 ml×1瓶

                2-8℃保存

                终止液

                3ml×1瓶

                6ml×1瓶

                2-8℃保存

                浓缩洗涤ㄨ液

                (20ml×20倍)×1瓶

                (20ml×30倍)×1瓶

                2-8℃保存

                  样本处理及要求

                  1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上∮清,保存过程中如出现沉淀,应再↘次离心。

                  2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集◥上清,保存过程中如有№沉淀形成,应该再次离心。

                  3.尿液:用无菌╱管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中々如有沉淀形成,应再次▓离心。胸腹水、脑脊液↓参照实行。

                  4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时㊣,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液▓,细胞浓度达到100万/ml左右。通过》反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份◥』。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

                  5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的←PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备︼用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充∏分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份↑待检测,其余冷冻∮备用。

                  操作步骤

                  1.标准品的稀释与加╱样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在 、第二孔中分别▽加标准品100μl,然后在 、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从 孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标♂准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加≡到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从〓第五、第六孔中各取50μl分别☆加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀╳后从第七、第八孔』中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九▲第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为6U/ml,4U/ml ,2U/ml,1U/ml,0.5U/ml)。

                  2.加样:分别设空白孔(空白对〓照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相▂同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释♀液40μl,然后再加待测样品10μl(样品 终稀释度↘为5倍)。加样将样品加于酶标板∏孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混∏匀。

                  3.温育:用封板膜封板后々置37℃温育30分钟。

                  4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤▂液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

                  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

                  6.加酶:每孔加入酶标㊣ 试剂50μl,空白孔ξ 除外。

                  7.温育:操作同3。

                  8.洗涤:操作同5。

                  9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混☆匀,37℃避光显色15分钟.

                  10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色●立转黄色)。

                  测定:以空∑白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加╲终止液后15分钟以◆内进行。

                点击进入上海广锐生物科技有限公司展台查看更多 来源:教育装备采购网 作者:上海广锐生物科技有限公司 责任编辑:张肖 我要投稿
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