1． 重组蛋㊣ 白分类
A.按蛋白分类 | B.按种↘属分类 |
a. 细胞因子 (Cytokines) | a. 人 (Human) |
b. 生长因子 (Growth Factors) | b. 小鼠 (Mouse) |
c. 趋化因子 (Chemokines) | c. 大鼠 (Rat) |
d. 激素 (Hormones) | d. 猴 (Rhesus Macaque) |
e. 神经营养因子 (Neurotrophins) | e. 猪 (Porcine) |
f. 酶 & 酶抑制剂 (Enzymes & Inhibitors) | f. 狗 (Canine) |
g. 其他 (Others) | g. 牛 (Bovine) |
B. 按种属分类 | h. 其他(Others) |
2．重组蛋白表达体系
MCE 重组々蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物
细胞。
3．重组蛋白纯度和浓度测定
重组蛋白纯＠ 度测定方法∩：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测
定法。
重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白№定量测定法；b. BCA 蛋白定量测
定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
4．重组蛋白运输状态
MCE 的大部分重组蛋白产品为冻干粉，在室■温环境中都是稳定的，一般采用
蓝冰或是室温运输。
5．重组蛋白表达体系卐对比
表达体系 | 优缺点 |
原核体系 | 繁殖快、成本低，产量高，但不能进行糖基化ζ修饰，常为包涵体 |
哺乳动物细胞 | 结构与天然蛋白最接近，完善的翻译后□加工，活性更好，但表达水平较低，周期长，技术要求※高 |
酵母细胞 | 易操作，蛋白∞背景弱，适合大规模生产，便于纯化，但存在产量不高以及糖基¤化达不到要求等ω 问题 |
昆虫细胞 | 功能与天然蛋白相似，对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势，但糖基化程度低，形式比较□ 单一，活性不如哺乳动物细胞表达系统 |
6．重组蛋白表达体■系选择
研究目的 | 蛋白要求 | 最适表』达系统 |
用作抗原，获得特异性抗体 | 纯度>80%，不需要蛋白修饰或天然活性，可带标签 | 原核表达体系 |
用于检测蛋白→质结晶及晶体结构研究 | 纯度>95%，浓度通常在 10 mg/mL | 2/3 是Ψ 原核表达体系，1/3 是昆虫细胞表达体●系与哺乳动物细胞表达体系 |
蛋白的≡功能研究 | 需要保存蛋白的天然活性 | 原核表达体系和真核表▲达体系 |
用于药物研究的蛋白质 | 一般要求尽量保存天然序列，具有天然活性 | 真核表达体系 |
7重组蛋白开盖使用前处理⊙
为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖」，离心(约
13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管〖壁的蛋白收集于管底。MCE 保
证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
8．重组蛋白复溶
a. 使用前先离心『(约 13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白
收集于管底。
b. 严◥格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度ㄨ。大
多数重组蛋白建议溶解▆在灭菌超纯水中，浓度不低于 100 μg/mL，以便于
后续进一步稀释至工作浓度。
c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进▓行混匀，低速离心
数秒。
d. 复溶后的重组蛋↘白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
9.重组蛋△白储存
由于每次冻融都会造成蛋白的部分变性，因此建议客户收到产品后适量分
装避免反复冻融。
a. 短期储存：
冻干粉状态产品在▼室温下存放 3 周，不影○响活性。
复溶后的产品在 4℃ 可稳定储≡存 1-2 周。
b. 长期储存：
冻干粉状态产品在 -20℃ 下，可稳定↓保存至少一年；推荐 -80℃ 长期保存，
以获得更№稳定性能的产品。
可选择包含一定浓度载体蛋白(0.1% BSA， 5% HSA， 10% FBS，或 5% 海
藻糖)的溶液或培养基复溶产品，分装后冻存于 -20℃ 下，可保存至少三个
月；推荐 -80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
注：分装〗冻存时，蛋白浓度不低于【 100 ng/μL，且每管的体积不可小于 20
μL。
10．载体蛋白介绍
载体蛋白主要用于提升重组蛋白复溶后◥的稳定性，同时也有利于避免产□品
粘附在管壁¤上。例如：HSA, BSA。
11.重组蛋◢白标签影响
蛋白标签指重组蛋白制备过程中与目的蛋白︻融合表达的蛋白或多肽。MCE
的重组蛋白产品大部分为无标签状态，但少数重组蛋白产品因为不同目的
需要加有标签。
a. 标签利于蛋白纯化。
b. 当目的蛋白无特定抗体直接鉴╳定，可利用标签进行 Western Blot 或
ELISA 分析方法鉴∮定。
c. Fc 标签可以提升重组蛋卐白的半衰期以提高分子的稳定性，同时也能够促
进重组蛋白形成活性二聚体。
重组蛋白标签对蛋白的生物∩学活性影响存在未知结论，但对大部ㄨ分检测应
用中，重组蛋白的标签对蛋白本身生♂物学活性并无影响，所以无需移●除。
MCE 对重组蛋白产品都已经做过生物学活性检测并将数据公示于 COA 中。
12.重组蛋白活力值与计算方法
MCE 重组蛋白的生物学活性 (ED50) 测定数★据在 COA 中可以获得。ED50 是
Effective Dose 50 的缩写，是可诱导 50% 最大反应的蛋白浓度 (ng/mL)。
计算公式如下:
MCE 的重组蛋白产品并未采用 WHO (National Institute for Biological
Standards and Control) 设定的标准▽来测定活力值，以上计算公式并不适
用于“International Units”和“ED50”的→转换关系，需要采用国际标准品
对比相同实验获↘得该重组蛋白的 IU 值。
13.重组蛋白 ED50 值的批间差
不同批次的产品或不同实验方法的测定都会导致重组∑蛋白产品的 ED50 值变
化，我们推荐客户根据自己的实验测定得到最合适的实际 ED50 值。
14.重组蛋白应用方案
MCE 重组蛋白产品的 COA 中显示的实验方案只是确认】该产品的 ED50 值，
但并不与终端客户的不同类型实验结果存在等效】性。如果客户需要应用在
不同于本公司产品测试的实验方法时，我们建议客户通过实际测试获得最
佳 ED50 值。
15.重组蛋白的种属交叉活性
重组蛋白的种属交叉活性々需要根据具体产品而定；建议尽量选择对应种属
的重组蛋白。如实在无法匹配种属，以下信息供参考：
a. 大多数人细胞因子对小鼠细胞有效 (仅少数例外)。
b. 多数小鼠细胞因子对人细胞有效，但特异性可能●不强。如小鼠的表〓皮生
长因子(EGF)对人的表皮♀细胞有活性，对人的其他种类细胞可能也有作用。
c. 干扰素、GM-CSF、IL-3、IL-4 具有种属特异性，即重组人的这些细胞因
子只能作用于人细胞，对小鼠和大鼠々等其他种而重组小鼠的这些◥细胞因子
也□仅用于小鼠，对人的细胞〒无效。
d. 成纤维细胞生长因子 (FGFs)、神经营◢养素 ( Neurotrophins，如 BDNGF、
GDNF、CNTF、β-NGF 等)、TGF-β 等高度保守，各种属间交叉活性强。
