植物叶片、组织呼吸速率的测定

　　实验准备：

　　仪器：氧电极系统一套;30ml针筒，剪刀，双面刀(或单面刀)，1ml移液器，镊子，吸管，吸水纸，打孔器。

　　试剂：(1)测定介质50mmol/L pH7.5的Tris-HCl缓冲溶液。称取6.05克Tris(三羟甲基氨基甲烷) 800～900ml水中，滴加1mol/L HCl，调pH7.5，加水1000ml。除此之外，测定介质还可用㊣磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的缓冲液。仅用pH7.5的水溶液也⊙可作测定介质。

　　(2)0.5mol/L KCl：称取1.86克KCl溶于50ml蒸馏水中。

　　实验步骤：

　　1准备好所需的仪〖器和试剂，安装好氧电极，并与计算机连接，校正(详细操作步骤见厂家提供的说明书或＠汉语说明书)。

　　2材料准备：取小麦、水稻等植¤物叶片(组织)，用打〒孔器取一定面积(或称取一定重量)(一般按每ml反应体积需0.5cm2叶碎片取样)，

　　将☆叶块放入盛有测定介质的小烧杯中，然后将小烧杯放到真空器中进行抽气，排出叶片(组织)细胞间隙内的气体，使叶片沉到底部。或者

　　将叶碎块倒入30ml注射器中，进行手工真空◣渗入，排除叶内气体，使ω叶块下沉。然后将下沉的叶块取出，用剪刀剪成面积约为2mm2的碎

　　片，放入氧电极反应杯中。

　　3呼吸速率的测定：

　　在盛有叶碎↘片的反应杯中加入1～2 ml的测定介质，然后放入磁转子。启动磁转子搅拌溶液，平衡1分钟左右后，开始测定，3～5min后

　　停止测定。氧电极的使〇用方法详见汉语说明书。

　　注意：如果使用的是透明反应杯，测定叶片的呼Ψ 吸速率时需要将反应杯遮光。

　　4反应结束后，清洗反应杯。重复步骤3，所有实验结束后，按说明书操作，清洗反应杯，清洁电极，保持电极的干燥。(注意事项见说明书)

　　5呼吸速率的计算：从记录曲线得到单位时间氧的变化量，根据叶片面积和反应介质的体积计算出样品的呼吸速ξ率。

　　完成该实」验可以选用的氧电极型号有：Leaflab2(只能用于测定叶片)、Chlorolab2、Chlorolab3、Oxygraph、Oxytherm。