四月，总是一个充满魔力的时节。花都开的缤纷艳丽，恨不得把世界妆扮成粉红色的新娘。枯树竟也爆出新芽，绿的活力四射。今天上海恒远小编带您了解实验中的小知识：双抗体夹心法实验原理及实验步骤!希望您会喜欢!

　　双抗体夹心法(常用于测定抗原)实验原理：

　　用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。

　　双抗体夹心法实验步骤：

　　一、材料准备：

　　1. 实验材料：血清、血浆、体液

　　2. 实验仪器：酶标比色计、96 孔板、移液枪、离心管、离心管盒

　　3. 所需试剂及试剂盒：碳酸盐≡包被缓冲液、抗体球蛋白、吐温-20、柠檬酸、硫酸

　　二、实验操作方法：

　　1. 包被抗体：用包被缓冲液稀释特㊣　异性抗体球蛋白至最适浓度(1～10 μg /ml)，每凹孔加 0.3 ml，4℃ 过夜，或 37℃ 水浴 3 小时，贮存冰箱。

　　2. 洗涤：移去包被液，凹孔用△洗涤缓冲液(含 0.05% 吐温-20)洗 3 次，每次 5 分钟。

　　3. 每凹〇孔加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃ 作用 1～2 小时。

　　4. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含 0.05% 吐温-20)洗 3 次，每次 5 分钟。

　　5. 加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃ 作用 1～2 小时或由预试实验确定作用时间。

　　6. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含 0.05% 吐温-20)洗 3 次，每次 5 分钟。

　　7. 加入 0.2 ml 底物溶液于每个凹孔(OPD 或 OT)，室温作用 30 分钟(另作一空白对照，0.4 ml 底物加 0.1 ml 终止剂)。

　　8. 加终止剂：每凹孔加 2M H2SO4 或 2 M 柠檬酸 0.05 ml。

　　9. 观察←记录结果：目测或用酶标比色计测定(OPD 用 492 nm)OD 值。

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