实验试剂

　　1. 10%中》性福尔马林(pH6.8～7.1)甲醛 10ml 蒸馏水 90ml 醋酸钠 2g

　　2. 酸性磷酸酶作用液

　　蒸馏水 90ml 0.2mol/L醋酸缓冲液(pH4.6) 12ml 5%硝酸铅 2ml

　　3. 2%β—甘油磷酸钠 4ml

　　先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合，随后分成大致相等的两份，一份中加硝酸铅溶液，另一份加甘油磷酸钠溶液，然后再将两者缓缓混合，边混边搅匀后若酸碱度值不到pH5.0，可加少量醋酸的调整。此作用液最○好在临用前配制，不能贮存。配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀，否则将严重影响实验结果。上海创赛科技▆提供9001-77-8,酸性磷酸酶Acid PhosphataseBR,10u/mg，液体 ,商品编号：D23-RM1170-500U，价格6080元。

　　4. 1%硫化胺溶液

　　硫化胺 1ml 蒸馏水 9ml

　　5. 姬︾姆萨染液(1：30)

　　姬姆萨原液 3滴 磷酸盐缓冲液(pH6.8) 5ml

　　6. 6%淀粉肉汤

　　牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1.0g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml

　　高压灭菌9.9×104pa(15磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，水温浴，促使溶解后置冰箱保存备用。

　　实验步骤

　　1. 取小白鼠」一只，每日腹腔注射6%淀粉肉汤1ml，连¤续注射三天。

　　2. 在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生理盐水1ml，过3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1～0.2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。上海创赛科技提供9001-77-8,酸性磷酸酶Acid PhosphataseBR, 0.5-3u/mg，粉末 ,商品编号：D23-RM1170-100mg，价格736元。

　　3. 将腹腔液滴在预冷的载玻片上，每片1～2滴，涂片，将玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱内(4℃)，让细胞△自行铺展。

　　4. 30min后，将玻片转入10%中性福尔马林，冰箱内4℃固定30min。

　　5. 自来水漂洗5min，把水甩干。

　　6. 转入酸性磷酸酶作用液中，37℃处理30min。

　　7. 自来水漂洗片刻。

　　8. 1%硫化胺处理3～5min。

　　9. 自来水＠ 冲洗，甩干。

　　10.用1∶30的姬姆№萨染液染色15min。

　　11.自来水冲去∏染液，用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。

　　12.对照实验：

　　将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min，使酶失活，再进行6～11步的同样实【验。

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