方法一

　　1、稀释。我们要留血浆(肝素钠抗凝的采血管采的血，5～6ml)，所以分离、取出血浆后加入和红细胞等体积的生理盐水，一般3ml左右，混匀。上海创赛科技提供肝素钠，Heparin sodium salt,商品编号：B11000262-1g，价格69.3元。

　　2、分离液，不在乎体积有多少，主要是高度，如果离心管很粗的话，就要多加一些，细一点的离心管就可以少加一些，一般高度要超过3cm。

　　3、分离血来源，成人外周血比较好分，脐血和胎盘血不好分。当然，发生溶血和凝血的话就↑更难分了。

　　4、血的保存，采血后不要放到4度冰箱(当然更不能冻啦)，常温，避光即可。从采血到分离不要超过12个小时，不然效果也々不好。

　　5、离心速度和时间。不同的离心机，肯定转速不一∞样的，实验室一般用水平离心机2500转，20分钟，基本上没有红细胞了，淋巴细胞也很多。

　　6、淋巴细胞分☆离液的保存不必放在4度，常温即可，无论是否开封了的。以往经验，分离液一放到4度后，无论复温的效果如何，分离的效果都没以前好。上海创赛科技提供淋巴细胞分离液，BR ,商品编号：D16-1013112-250ml，询价。

　　方法二

　　1.用0.85%生理盐水对倍稀释抗凝血液标本。

　　2.取淋巴细胞分离液3-4ml于干净试管中。

　　3.往淋巴细胞分离液上层缓缓加入2倍于分离液体积的稀释外周血量。

　　4.2000-2500RPM转速离心15分钟。上海创赛科技提供淋E23-TD4M血细胞洗涤离心机 ,商品编号：E23-TD4M-台，询价。

　　5.用吸管吸取中层白色浑浊液于eppendorf管-20℃保存待用。

　　注意事项

　　1、取血的质量很重要，分离界面清楚的总是血样质量好的)，用Hanks对倍稀释!分离液一般是稀√释血量的1/2!

　　2、离心时间很有关系各实验室离心机不同!

　　3、破碎红细胞用双蒸水少于一分㊣　钟。

　　4、试管的干净程度也有关系的。

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