在正相色谱中，一般采用极性键合固定相，硅胶表面键合的是极性的有机基团，键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂，如烃类√溶剂，或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、乙腈等)，以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离极性化合物。一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。组分的分配∑ 比K值，随其极性的增加而︾增大，但随流动相中极性调节剂的极性增大(或浓度增大)而降低。同时，极性键合相★的极性越大，组分的保留值越大。该法主要用于分离⊙异构体，极性不同的化合物，特别是用来分∏离不同类型的化合物。
在反相色谱中，一般采用非极性键合固定相，如硅胶-C18H37(简称ODS或C18)硅胶-苯基等，用强极性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。
正相色谱和反〓相色谱的区别：
本Ψ 质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序ㄨ由弱到强;反相色谱◤柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
1、正相色谱
正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团，如(NH2，APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。 由♀于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强↓，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷(Hexane)，氯仿(Chloroform)，二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
2、反相色谱
反相色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团Ψ的键合相。反相色谱所使用的流动〓相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物ぷ。样品流出色谱柱的顺序是极性较强①的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
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