常用的固定剂种类很多，固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。固定剂可分为两类：有机溶剂和交联剂。

　　有机溶剂：如乙醇和丙酮能够去处脂 类物质使细胞脱水，把蛋白质沉淀在细胞结构上。

　　交联剂：如多聚甲醛一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来，形成一个相互交联的抗原网。许多人发现用交联剂固定细胞效果较好，尤其是做免疫荧光的时候，当然没有固定的规则可言。不过，单独用多聚甲醛固定的细胞不能使抗体进入细胞内，因此，标本固定后必须用非离子去污剂透化标本。

　　方法一

　　1) 900 ml dd H20 500 ul 1N NaOH

　　2) Heat to 65-70℃

　　3) While stirring, add 40 g paraformaldehyde

　　4) Continue heating and stirring until paraformaldehyde is dissolved

　　5) Let cool to room temperature

　　6) Add 100 ml of 10X PBS

　　7) pH to 7.3 with HCl

　　8) Sterile with filter

　　9) Store at 4℃, protected from light

　　方法二

　　1)称取40gPFA(多聚甲醛)溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中，持续加热。上海创赛科技提供多聚甲醛，Paraformaldehyde，商品编号：B11000407-25g，价格41.3元。

　　2)磁力搅拌至60-65℃，大约1-2小时可ㄨ以溶解，使成乳白色悬液。上海创赛科技提供E22-MYP11-2A型智能恒温磁力搅拌器，商品编号：E22-MYP11-2A，询价。

　　3)用1.0mmol/L 的NaOH调PH至7.0使呈清亮状(滴加)，再加入约500ml 2×PBS，充分混匀(在冰浴或冷水浴中)。上海创赛科技提供PBS缓冲液，商品编号：D16-1027378-2ml，价格23元。

　　4)检测PH，过滤♂后定容至1000ml，室温或4℃(保存备用)，使用前新鲜配制。

　　注意：

　　1.配制时应在通风条件下操作，并避免接触皮肤及吸入(戴口罩及手套)，因PFA有较强的毒性，对粘膜及皮肤有刺激作用。

　　2.加热时，温度不可过 高，常为60-65℃。否则PFA降解失效，配制好的PFA虽可有效一点时间，但过久的液体，固定效果下降，应用前新鲜配制。

　　除了用DEPC水配制PFA外，也可以用灭菌蒸馏水或经DEPC处理的0.01-0.1%/L的PBS配制，方法及主要事项同上。上海创赛科技提供焦碳酸二乙酯，DEPC (Diethylpyrocarbonate)，1609-47-8，商品编号：B11000132-5ml，价格64.5元。

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