本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人维生素B12（VB12）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫●吸附试验（ELISA）。往预先包被人维生素B12（VB12）捕获抗体的包被微孔中，依次╲加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的〒人维生素B12（VB12）呈正相关。用↘酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样∏品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速↓小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠Ψ 檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟∞取上清。3. 细Ψ 胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上▃清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融↓，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前☉室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤∞液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 预处理后的样本无需稀释，直接取50μL加样即可。4. 严格按照ζ　说明书中标明的时间Ψ、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成☉名称 96孔配置 48孔配置 备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无标准品（6管） 0.5ml/管 0.5mL/管 无样本稀︽释液 6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底▓物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张 无说明书 1份 1份 无自封袋 1个 1个 无注：1、标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/ml.2、在样本值超过标准品最高浓度的情况下，可用样本稀释液适当稀释样本。试剂的准备 20×洗涤缓冲液∩的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液︽加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体〖，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸①上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室☆温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白ζ孔什么都不加；标准品孔各加不同◣浓度的标准品50μL；3. 待测样本孔各◣加待测样本50μL；4. 随后标准品孔和☆样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温ω　育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗※板）。6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 所有孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长♀处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓↙度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算【各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相→关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/ml。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光」防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体【实验，否则所产生的一切后果，由㊣　实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反」说明书操作，后果由实验者承担。