一、植物 组织蛋白质提取方法1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰」上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机 离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制ξ　备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl(pH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷↑酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方◣法针对SDS-Page ，垂直板电√泳!二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸―丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品∴体积3倍的提◢取液在-20℃的¤条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂卐解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时∞间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙∑　醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再◥加入1M的DTT65μl/ml。这◆种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点!当然单向电泳也∏同样适用，只是电泳的条▲带会减少!三、组织：肠黏▼膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量)倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95%乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4度，弃上清↘重复〖0.3M盐酸胍/95%乙醇步2次沉淀中ξ　加入100%乙醇 2ml充分振荡混匀←，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1%SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存(或可〓直接用于WESTERN BLOT)存在的问题：加入1%SDS后沉淀不溶】解，还是很◇大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶?测浓度，含量才1mg/ml左右。解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5-10分钟，效果很○好的。四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根1、200毫克样品置于冰上磨碎2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清3、重复离心5minlysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40五、蛋白质样品制备秧苗↓蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯∮烷酮)及少量石英砂，用液氮研√磨成粉，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇)，混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀复溶于∩1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，(有必要再用80%丙酮(含10 mMβ-巯基乙◤醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。按每mg干粉加入20μl(可调)UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖∞醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度 (温度低，高浓度★的尿素会让溶液结冰)16000 r/min离心15 min，离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳。或者-70度保存六、植物根中蛋白质的抽取(1)sample,液氮研磨(2)装1.5 ml centrifuge 用tube(3)加 1M KH2PO4 K2HPO4 700μl(4)12000 rpm,4度,10-15minite(5)取上层液，蛋白质就在里■面