为什么要重视细胞培养中的支原体污染?

　　您的实验结果是否能保证没有受到支原体污染的影响?

　　世←界性难题!!!!Nature最新发布细胞研究领域中支原体污染问题严重性

　　Ewen Callaway. Contamination hits cellwork. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a

　　1. 污染率高：在细胞研究领域，支原体是臭名昭著的污染源，二十世纪九十年代的支原体污染率是四分之一，而◣目前有仍然有超过十分之一的基因表达研究(许多曾发表在顶尖杂志上)，表现出支原体污染的迹象。

　　2. 影响日趋严重：虽然支原体污染并不一定意味着研究结果无效，但它会影响数百个基因的表达，并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在目前测试的一组受污染¤的数据中(淋巴瘤细胞)，已经鉴定出61个被支原体改变的基因，干扰了实验结果。这无疑是对时间，资源，经费极√大的浪费;

　　3. 难察觉：支原体污染完全是不留痕迹的，污染后的细胞生长速率一般并未发生显著的影响，无法用◣肉眼识别，除非采用专门的支原体检测方法检测;

　　4. 污染源多：“草率操作”、细胞系流通的交叉污染、操作人员自身都是很重要的污染源;

　　5. 难去除：支原体体积小，无细胞壁，约有1%的支原体可通过过滤器，且一般抗生素◥根本无法有效抑制或者去除支原体，另外，部分抗生素使用后会对细胞产生敏感效果，从而影响细胞的状态;

　　6. 重视程度日益增加：顶尖杂志发表实验结果需验证支原体污染影响，在国际上，支原体污染检测已经日益成为细胞培养污染常规检测之一，有效规避细胞支原体污染。

　　支原体检测系列№

　　传统的支原体检测方㊣　法包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、DNA荧光染色检测以及PCR检测，除PCR检测方法以外，其他检测方法大多耗时长，要求检测人员具有卐丰富的经验，并且无法获得足够的灵敏度和特异性，对于一些稀有的支原体亚种无法有效检测。

　　Applichem设计的支原体检测试剂盒系列产品均是基于PCR方法，根据支原体16S rRNA保守序列设】计引物，经过PCR反应扩增其16S rRNA片段，后采用琼脂糖电泳方法检测270bp条带。相对传统方法而言，具有强大↑优势：

　　a) 高灵敏度：敏感度高达100~1000CFU/ml，仅需要0.5 - 1.0 ml细胞上清样本即可检测;

　　b) 检测品种广泛：可检测常规品种，同时对于稀有亚种也能同效检测，如M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis, M. bovis，几乎覆盖⊙自然界80余个品种;

　　c) 快速：操作时间只需30分钟，全程5个小时内即可得到检测结果;

　　污染样本与对照的琼脂糖检测结果

　　DNA marker (100bp DNA ladder)

　　negative control

　　positive control

　　inhibited sample

　　negative sample

　　contaminated, positive sample

　　7 strongly contaminated positive sample

　　7 sample sample

　　可靠：试剂盒中包括有阳性对照DNA，可保证

　　实验结果的可重复性，减小因〗操作而带来的误差;

　　e) 安全性：无支原体培养过程，有效避免污染扩大;

支原∑　体清除系列

　　对于普通细胞系，遭受污染以后可以通过重新复苏，购买等途径更换样本，但是对于一些较难获得的样本，如干细胞，原代细胞，经过特殊处理的，或订＠ 购困难的细胞，一旦遭受支原体污染后，一定要马上进行处理。Applichem研发的支原体清除的Myco系列产品，可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效的清除支原体污染，并可以针对不同程◣度，不同细胞样本进行针对性处理，处理过程简单，对细胞不会造成任何副作用。

细胞污染预防系列

有效保护细胞的最好方式是对于细胞培养环境的预防，如工作环境定期消毒处理，严Ψ格实验操作，保证器皿无菌等各方面。在实验室中，CO₂培养箱，C0₂培养∴箱水盘，水浴锅是非常重要的污染源。Applichem研发有系列污染预防系列产品专门针对这3大污染源，可有→效预防真菌（及芽孢）、细菌、病毒等污染。使用方便，无腐蚀性，安全高效。

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