小鼠肿◥瘤坏死因子α(TNF-α)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶】标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【小鼠肿瘤⌒　坏死因子α(TNF-α) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用 计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释ζ　倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值〗代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍』数，即为样品的实际浓度。试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96） 说明书:1份 密封袋:1个标准品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品Ψ稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存』终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保◥存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α) 水平。用纯化的小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依▂次加入肿瘤坏死因子α(TNF-α) ，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α(TNF-α) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗︽体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度↓（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠肿「瘤坏死因子α(TNF-α) 浓度。目的：本试剂盒用于测定∩小鼠血清，血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α(TNF-α) 的含量。服务承诺：?供货期：款到发货。工作时间内免费的技术咨询和指导?。请来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。保存条件及有效期：试剂盒保存：2-8℃| 有效期：6个月 【小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α) elisa试剂盒】样本处理及要求№：1. 血清：室温血液自▲然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集ξ　上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离々心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细№收集上清，保存过◆程中如有沉淀形成，应该◣再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次√离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞〓培养上清：检测分泌性的成份︻时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞◇浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量※的︼PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将●标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用︾。6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实∩验。若不╳能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反卐复冻融.7. 不能ξ检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上□　设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加Ψ 标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第╱三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加∞标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第▓五、第六孔♀中各取50μl分别⊙加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀◥释液50μl，混匀后从第七、第八→孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别〖为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。2.加样：分别设↘空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相∏同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终㊣稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔【壁，轻轻晃》动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸↙馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入○酶标试剂50μl，空←白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显＠ 色剂A50μl，再加入∏显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转「黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的↑吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以〖内进行。【小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α) elisa试剂盒】注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后◣方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀※释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响♂结果。3．各步加样均应使用加样器，并↓经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如ω标本数量多，推荐使☆用排枪加样。4．请□　每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如■标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数∞（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光①保存。7．严格按照说〓明书的操作进行，试▂验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分☉不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。试剂盒性◆能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数∑R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：0.2IU/L - 6IU/L