人肾上皮细胞系包括293细胞和293T细胞, 根据文献资料记载的数据,我们可以对293细胞和293T细胞有一个简要地了解。293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞。表达转染的Ad 5的基因。早期报道认为此细胞含有Ad 5基因组左端和右端,现已清楚仅含有左端序列,此细胞系人腺病毒滴▓度高。室温不贴壁,37℃几日后重新贴壁。表达由整合素beta-1 亚基与玻基结合素受体 alpha-v 亚基组成的玻基结合素细胞表面受体。下面从其来源、形态和染色体核型对293和293T这两株细胞的进行区分,并介绍一下他们的培养条件。
首先关注这两株细胞的组织来源。293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点@ 与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高,转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
293细胞核293T细胞形态均为上皮细胞,生长特性为贴壁细胞,能致瘤。
这两株细胞的染色体核型均为亚三倍体人细胞系。染色体众数为64,30%的细胞有64 条染色体。4.2%的细胞染色体数目更多。多数细胞der(1)t(1;15)(q42;q13),der(19)t(3;19)(q12;q13),der(12)t(8;12)(q22;p13),还有四条标记染色体,有的细胞另有5条标记染色体。der(1)与M8 (or Xq+)常常成对出现。N17 与 N22各有四条。值得注意的是多数细胞有三条X染色体,两条Xq+,一条Xp+。
293细胞和293T细胞的培养条件是采用ATCC培养基:90%的MEM Eagle,加入2mM L-谷氨酰胺,1.5g/L碳酸氢钠,0.1mM必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠;10%加热灭活的马血清。于37℃培养。而293细胞与293T细胞的传代则有些许差别。293细胞的传代过程为:弃培养基,含0.25%胰酶, 0.03% EDTA 消化液洗涤,弃去,加1-2ml消化液室温或37℃消化。加入新鲜培养基,吸出,分到新培养皿中。一传二至一传四。而293T细胞的传代过程则为:生长快,通常倍增时间不到一天。每3-4天1:10至1:20稀释,5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松,可只用EDTA消化,不要用胰蛋白酶过度消化。这两株细胞再进行培养及更换时都是每两到三天换液一次。293细胞和293T细胞的冻存液均采用95%培养基;5%,DMSO。