ELISA检测实验最常用的酶系统有哪些?对此问题,上海恒远技♂术部为您分析解答:
一、碱性磷酸酶(AP)
反应底物:氮蓝四唑又名为氯化硝基四氮唑蓝,常和BCIP配成混合液,为碱性磷酸酶底物之一,在碱性磷酸酶的催化下生成不溶性的蓝色产物。常用于免疫组化(IHC)、SOD活性测定、免疫细胞化学(ICC)和蛋白印迹(WB)等实验。
二、辣根→过氧化酶(HRP)
1. HRP催化反应原理
HRP对受氢体◤的专一性很高,除H2O2外,仅作︽用于小分子醇的过氧化物和尿素的过氧化物。后者为固体,作为试剂较↓H2O2方便。许多化合物可作为「HRP的供氢体,ELISA常用的供氢体底物为邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB)和(ABTS)。
2. 常用底物
① OPD(邻苯二胺)为在ELISA中应用最多的底物,灵敏度高,比色方便。缺点是配成应用液←后稳定性差,而且具有致异变性。
② TMB没有OPD的缺点,经酶作用后由无色▆变蓝色,目测对比鲜明;加酸停止酶反应后变黄色,可在比色计中定量;因此应用日见增多。
③ ABTS灵敏度【不如OPD和TMB,但空白值很低。